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研究背景与目的：结直肠癌是常见的严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年递增。目前手术是结直肠癌主要的治愈手段，但初诊时已有20～25％的患者已经出现转移，手术后亦有20～30％的患者会出现转移复发，转移是导致结直肠癌患者治疗失败和死亡的主要原因。Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein，RKIP)是目前发现的与肿瘤转移关系密切的基因之一，研究显示对前列腺癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤转移具有抑制作用。国外及我们的初步研究结果在免疫组化水平提示RKIP对结直肠癌转移亦可能具有抑制作用，但尚需更多的证据证实，因此本研究旨在细胞水平进一步探讨RKIP基因对结肠癌细胞迁移、侵袭、增殖、凋亡的影响。
研究方法：用RT-PCR和Western Blot检测RKIP在结肠癌细胞株和正常结肠上皮组织中的mRNA和蛋白表达情况，筛选出高表达RKIP的结肠癌细胞株，瞬时转染siRNA靶向敲除RKIP基因，通过MTT法、Transwell迁移、侵袭小室、流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡来分析RKIP对结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭能力及与细胞周期和细胞凋亡的影响。
研究结果：
1.RT-PCR及Western Blot结果显示：正常的肠上皮组织中RKIP的mRNA和蛋白表达量明显高于结肠癌细胞株；在四种结肠癌细胞株中，SW480细胞RKIP的mRNA和蛋白表达量均最高，LOVO细胞株RKIP的mRNA和蛋白表达量均最低。
2.本实验采用的siRNA序列和siRNA转染浓度可有效下调RKIPmRNA和蛋白质表达水平；WesternBlot结果经灰度测定，显示干扰效率可达82％。
3.MTT结果显示，SW480-SI组和SW480-NC组细胞增殖速度的差异无统计学意义(P＞0.05)。
4.流式细胞仪分析SW480-SI组和SW480-NC组细胞的细胞周期，结果显示G0～G1期、S期、G2期细胞分布比例无明显差异。
5.SW480-NC组和SW480-SI组24h穿过聚碳酸酯膜的细胞数分别是20±2、58±6，48h穿过铺了Matrigel的聚碳酸酯膜细胞数分别为21±3、73±5，表明SW480-SI组细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组(SW480-NC组)明显增强(P＜0.05)。
6.流式细胞仪分析细胞凋亡结果表明，SW480-SI组和SW480-NC组细胞的凋亡率无明显差异。
结论：正常的肠上皮组织中RKIP的表达远高于肠癌细胞株，低转移潜能的SW480细胞RKIP的表达最高，高转移的LOVO细胞中RKIP的表达最低，提示RKIP的低表达可能与结肠癌细胞的侵袭、转移等恶性行为有关；瞬时转染siRNA靶向敲除结肠癌细胞SW480的RKIP基因后，SW480细胞的增殖能力、细胞周期及细胞凋亡均无明显变化，而迁移、侵袭能力显著增强，从而进一步在细胞水平证实RKIP基因在肠癌中具有抑制转移的作用。