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目的旨在研究海藻糖对降低4℃保存血小板低温储存损伤的作用、从活性氧（ROS）表达水平的角度初步探究海藻糖降低4℃保存血小板低温储存损伤的机理,建立一种既可延长血小板的保质期又能保证血小板输注安全有效的保存方法。方法研究一海藻糖对4℃保存血小板低温储存损伤的影响1.22℃与4℃保存血小板的各体外功能的比较将新鲜ABO同型浓缩血小板样本作无菌汇集后,随机均分成两组保存,分别为22℃组和4℃组。各组分别于保存的不同时间点无菌取样,检测血小板参数、代谢学及功能学指标。2.不同浓度海藻糖4℃保存血小板体外功能的比较及海藻糖最佳浓度的筛选将新鲜ABO同型浓缩血小板样本作无菌汇集后,随机均分成六组保存,分别为:4℃组（对照,全血浆保存）、M-Sol组（对照）、1g/L海藻糖组、5g/L海藻糖组、15g/L海藻糖组及25g/L海藻糖组,均置于4℃保存。各组分别于保存的不同时间点无菌取样,检测血小板参数、代谢学及功能学指标。研究二初步探究海藻糖降低4℃保存血小板低温储存损伤的机理1.22℃与4℃保存血小板ROS表达水平与体外功能变化的相关性研究将新鲜ABO同型浓缩血小板样本作无菌汇集后均分为两组保存,分别为22℃组和4℃组。在不同保存时间点,测定两组ROS表达水平及各功能指标:凋亡率、CD62p阳性率及最大聚集度。2.验证4℃保存血小板ROS表达水平与体外功能变化的相关性研究通过添加N-乙酰半胱氨酸（NAC）降低4℃保存血小板的ROS表达水平,将新鲜ABO同型浓缩血小板样本作无菌汇集后均分为四组保存,分别为对照组（全血浆保存）、5m M NAC组、10m M NAC组和15m M NAC组,均置于4℃保存。在不同保存时间点,测定对照组与各浓度NAC组的ROS表达水平及各功能指标:凋亡率、CD62p阳性率及最大聚集度。3.海藻糖对4℃保存血小板ROS表达水平的影响将新鲜ABO同型浓缩血小板样本作无菌汇集后均分为两组保存,分别为对照组（全血浆保存）和5g/L海藻糖组,均置于4℃保存。通过测定保存效果最优的5g/L海藻糖组与对照组在不同保存时间点的ROS表达水平,并分别计算两组血小板保存3d内以及保存5d内ROS的生成量。结果研究一海藻糖对4℃保存血小板低温储存损伤的影响1.22℃与4℃保存血小板体外功能的比较在保存过程中,4℃组除血小板计数与22℃组差异不明显外（P＞0.05）,PDW、MPV及14d内GLU浓度变化值,4℃组均明显低于22℃组（P＜0.05）,且4℃组血小板的p H值、最大聚集度均明显高于22℃组（P＜0.05）,说明4℃保存血小板的聚集功能更好,形态和代谢维持的更好,但4℃组血小板的CD62p阳性率显著高于22℃组（P＜0.05）,表明4℃保存血小板更易被激活,活化程度更高。2.不同浓度海藻糖4℃保存血小板体外功能的比较及海藻糖最佳浓度的筛选保存d1或d3开始,各浓度海藻糖组血小板的CD62p阳性率均显著低于4℃对照组（P＜0.05）,其中同一时间点各浓度海藻糖组中均以5g/L海藻糖组的CD62p阳性率最低,保存d7开始,5g/L海藻糖组的CD62p阳性率显著低于其他各组（P＜0.05）,说明海藻糖可抑制4℃血小板的活化,且海藻糖的最佳浓度是5g/L。此外,保存期间,5g/L海藻糖组的CD62p阳性率显著低于22℃组（P＜0.05）。保存期间,血小板计数、PDW、MPV、14d内GLU浓度变化值及9d内LAC浓度变化值,各浓度海藻糖组与4℃对照组无显著差异（P＞0.05）;保存d14时,各浓度海藻糖组的p H值均高于4℃对照组,其中5g/L海藻糖组的p H值最高,与4℃对照组有统计学差异（P＜0.05）;保存d14时,各浓度海藻糖组最大聚集度与4℃对照组均无显著差异（P＞0.05）,以上结果表明海藻糖4℃保存血小板可较好地维持血小板的形态、代谢和聚集功能,且海藻糖的最佳浓度是5g/L。研究二初步探究海藻糖降低4℃保存血小板低温储存损伤的机理1.22℃与4℃保存血小板ROS表达水平与体外功能变化的相关性研究保存过程中,4℃组的ROS表达水平显著高于22℃组（P＜0.05）;22℃组的ROS表达水平与血小板凋亡率和最大聚集度有相关性（P＜0.05）,与CD62p阳性率无相关性（P＞0.05）;4℃组的ROS表达水平与血小板凋亡率、CD62p阳性率及最大聚集度均有相关性（P＜0.05）,且相关系数绝对值均大于22℃组,说明4℃组的ROS表达水平与血小板体外功能变化的相关性更高,ROS表达水平可能是4℃血小板低温储存损伤的关键影响因素之一。2.验证4℃保存血小板ROS表达水平与体外功能变化的相关性研究保存期间,5m M NAC组、10m M NAC组及15m M NAC组呈浓度依赖性渐次降低4℃血小板的ROS表达水平,同时各浓度NAC组的ROS表达水平与4℃血小板的凋亡率、CD62p阳性率及最大聚集度的相关系数绝对值也依次减小,表明5m M NAC组、10m M NAC组及15m M NAC组的ROS表达水平与4℃血小板各体外功能变化的相关性逐渐减弱,进一步验证ROS表达水平可能是4℃血小板低温储存损伤的关键影响因素之一。3.海藻糖对4℃保存血小板ROS表达水平的影响本研究中的5g/L海藻糖组与对照组相较,保存前需37℃水浴加热2h,使海藻糖内载入血小板胞内,该处理可能导致两组在保存前ROS表达水平的基础值不同,造成5g/L海藻糖组保存前的ROS表达水平更高。故本研究主要比较5g/L海藻糖组与对照组保存3d内及保存5d内ROS生成量的差异,结果显示5g/L海藻糖组保存3d内ROS生成量和保存5d内ROS生成量均显著低于对照组（P＜0.05）,表明海藻糖可能通过下调ROS表达水平降低4℃保存血小板的低温储存损伤。结论1.海藻糖可显著降低4℃保存血小板CD62p阳性率,抑制血小板的活化,降低4℃保存血小板的低温储存损伤,其中5g/L海藻糖组的保存效果最优。2.ROS表达水平可能是4℃保存血小板低温储存损伤的关键影响因素之一。3.海藻糖通过下调ROS表达水平可能是其降低4℃保存血小板低温储存损伤的途径之一。