即墨温泉耐热性木聚糖酶产生菌的分离及其酶学性质研究

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耐热型木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶,它在饲料、造纸、食品、能源工业和环境科学上有着广阔的应用前景。随着分子生物学、结构生物学的发展及蛋白质工程的应用,对木聚糖酶结构和功能的研究不断深入。本论文首先通过对从即墨温泉水中用透明圈筛选法获得的6株(L1,L2,L3, L4,L5,L6)产耐热性木聚糖酶菌株的比较分析,得到一株高产木聚糖酶菌株L2,并在此基础上对L2进行了与酶的活性有关的因素分析如:半纤维的添加方式,半纤维素的添加量,温度,pH,碳源,氮源,表面活性剂Tween-80,金属离子和发酵时间等对L2产酶活性的影响,得出L2的最佳发酵条件是:半纤维素以2/3底物浓度泥状物的形式加入:温度75℃;PH8.69;碳源采用廉价的半纤维素;氮源采用硫酸铵和硝酸铵(1:1);金属离子对酶活影响较大,Li+、Mg2+、Ca2+有激活作用,Ba2+、Fe3+、Ag+、Sr2+有抑制作用;EDTA对木聚糖酶的抑制作用明显,在反应体系中添加EDTA的浓度≥0.5mmol/L时,L2产生的木聚糖酶活性完全被抑制:发酵时间144h时酶活最高720.6IU/mL。利用国内外普遍用于优化的正交试验设计对已分纯菌种的发酵温度(28℃, 37℃,50℃)、发酵时间(48h,96h,144h)、发酵液pH(6.09,7.54,8.69)以及菌株类别等影响发酵产酶的因素进行正交组合,设计出一套简易发酵装置流程,按正交设计进行发酵。利用DNS(3,5-二硝基水杨酸)显色法以木糖标准曲线测出发酵过程中所产木聚糖酶活力。通过极差分析法对正交试验结果进行数据统计,得到影响该产生菌发酵产木聚糖酶的因素依次为:菌株>时间>pH>温度。其最优的发酵温度为50℃,最优的发酵时间为144h,最优发酵液pH为8.69,最佳的菌株为L2,发酵条件得到优化,提高了木聚糖酶产量;通过对L2在发酵时间,温度,pH,麸皮含量以及贮藏时间等因素的固态发酵优化研究,得到固态发酵最优条件:发酵时间144h,温度70℃,pH7.54,麸皮含量2/3,储藏时间120d时酶活力仍能达到92%,说明L2所产木聚糖酶具有很好的贮藏稳定性;前后发酵方式的埘比发现,固态发酵能有效的提高L2产木聚糖酶的活性。
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