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乳酸菌是发酵乳生产中对产品品质影响最直接、最重要的因素,它决定着发酵乳的营养成分和感官指标。藏灵菇是西藏林芝地区的特色传统发酵乳,与知名的Kefir结构成分相近,但起源不同。藏灵菇乳具有独特的风味和地域特色,从中寻找具益生潜力且可以作为发酵剂菌株十分可行且具有现实意义。本研究从藏灵菇乳中分离得到了79株乳酸菌。其中M14、M16和G60三株乳酸菌在酪蛋白平板上产生透明圈,说明其能产蛋白酶;通过形态特征和生理生化特征鉴定三株菌为干酪乳杆菌、植物乳杆菌和戊糖乳杆菌。三株菌的最大菌浓度可达到1010 cfu/mL,可以在pH 1.5的环境下生长,可以耐受1.2%的胆盐。三株菌中M16酶活力相对更强,pH 7.2时酶活力为17.163μg/（mL·min）。通过试验得到M16原生质体制备与再生的最优条件是:溶菌酶浓度0.5μg/mL,处理温度35℃,处理时间30 min。在这个条件下,原生质体的制备率低,为55.6%,但再生率较高,为42.2%。探究了紫外线诱变的致死剂量,确定90%致死剂量为:15w紫外灯下距离30 cm照射280 s。添加氯化锂会增大正突变率,确定添加量为0.5%。以M16为出发菌株,对原生质体进行紫外线-氯化锂复合诱变育种。以酪蛋白再生平板初筛,选取透明圈大于出发菌株M16的菌落。共筛选出24株正向突变株,编号为M1601-M1624。其中,M1624、M1611和M1608三株菌培养液OD600值较高,生长旺盛,与出发菌株M16相比有显著性提高;M1619和M1624产酸与出发菌株M16相比显著降低;五株乳酸菌的耐酸能力和耐胆盐能力与出发菌株M16无显著差异;五株乳酸菌的蛋白酶活力遗传稳定,几乎没有下降。五株乳酸菌蛋白酶酶活力最高的为M1611,第5代仍有21.463μg/（mL·min）,相对出发菌株提高了25%,且M1611的产酸、耐酸能力、耐胆盐能力与出发菌株M16无显著性差异。