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前言 多药耐药（multidrug resistance，MDR）最终可导致急性白血病（AL）化疗的失败。MDR产生原因复杂，膜转运相关耐药蛋白中P-糖蛋白（P-gp）的表达是最常见、最重要的原因。 P-gp是一个跨膜糖蛋白，在ATP和钙离子存在下能将蒽环类抗生素、长春花属生物碱等亲脂性药物从细胞内转运到细胞外而导致耐药。抑制P-gp功能可恢复P-gp过表达的肿瘤细胞对抗癌药的敏感性。钙离子拮抗剂维拉帕米（VRP）能逆转P-gp介导的耐药，于1989年应用于临床，并取得了一定疗效。现在除VRP外，还有多种P-gp功能抑制剂，其中环胞菌素A（CsA）和CsA衍生物PSC833临床常规使用后均能达到有效抑制P-gp功能的血药浓度，且抑制作用强于VRP，是临床药物调节剂中较有前途的化合物。但是，对P-gp准确的检测是判断P-gp与耐药关系及P-gp逆转剂应用的前提。为了明确急性白血病耐药与P-gp的关系，本实验采用免疫组化、流式细胞仪二种方法检测P-gp表达，同时检测P-gp的功能。结果表明：复发／难治组、≥50岁组和CD34+组P-gp功能阳性率高，P-gp功能检测比表达检测更准确、更具有临床指导意义。 实验方法 一、细胞培养 白血病K562细胞敏感株K562／S及其耐柔红霉素（DNR）的耐药株K562／D按本实验室常规培养，所有实验均采用对数生长期的细胞，分别作为P-gp表达、功能检测的阴性、阳性对照。 二、临床资料 AL患者50例，其中男22例，女28例；平均年龄42．6岁，均符合FAB诊断标准。其中初治急性淋巴细胞白血病(AMi厂4例，复发／难治ALL例。初治急性髓性白血病(AML尸0例，其中急性早幼粒细胞白血病(APL广3例。复发／难治 AML 5例，其中复财难治APLI例。以下AML均不包括APL。 三、单个核细胞的分离 取肝素抗凝外周血或骨髓3－SM（幼稚细胞＞用呢X用h－m11密度梯度离心法分离单个核细胞。 四＊－gp表达的检测 流式细胞仪检测 P－gp的表达，阳性细胞＞10％判定为 P－gP表达阳性。 免疫组化法检测P一部的表达，阳性细胞＞20％判定为P－PP表达阳性。 五J－gp功能的检测 利用流式细胞仪检测白血病细胞对Rh；。的蓄积、释放，Rh；。。蓄积率＞30％或释放率＞15％判定为 P－gp功能阳性。 六人D。表达的检测 一抗为抗CD。抗体，其它步骤、条件及阳性判定标准与P－P的免疫组化检测相同。 实验结果 一J－P表达 采用流式细胞仪检测P－P表达，50例患者标本中仅4例阳性，无法进行组间比较。以后P－P表达均指免疫组化方法所检测的P－gp表达。17例初治AML组中7例P一部表。”，占41．二％J 3例初治 APL组中无 P－③表达＼明显低于初治 AML组河 ·2·＜0．05）。14例初治 ALL组中 4例 P－gP＄达”，占 28．6锯，与初治＊＊L组无差异（P＞o．05）。 将所有病例分为初治、复协难治两组，44例初治组＊例P－gp＄达＼占25％；6例复发邓［治组中2例p－gp＄。＼占33．3％，两组无差异（P＞o．05）。 二、P－gp功能 17例初治 AML组中 6例 P－③功能＼占 35．3％；13例初治APL组中无 P－gPto能“，明显。低于初治 AML组（P＜0．05）。14例初治ALL组中4例P－w咖／，占28．6％，与初治AML组无差异u＞0．05人 44例初治组中 P－gPtote＼0例，占 22．7％，6例复发／难治组中 4例 P－gPte能”，日 66．7阮，高于初治组（P＜0．05）。 P－gp表达与功能呈正相关（P＝0．031，r＝0．341）。 三人D。表达 问例初治 AML组中 11例 CD。＼占 64．7％／ 例初治 ALL组中4例＊0。＼占28．6％，与初治＊＊L组无差异(P＞O．05人除APL夕，31例初治组中15 例CD。”，占48．4阮；5例复发／难治组中／ 例＊礼”，占80阮，两组无差异（P＞0．05）。 CD。表达与 P－gP表达呈 正相关（P＝0．001，r＝0．475）；CD。表达与 P－gP功能也呈正相关（P ＝＝ 0．003，r＝0．429）。 四、＜50岁、＞ 50岁 H组 CD。表达 JP－gp表达 JP－gp功能 除＊PL外，19例。＜50岁初治组中，C民／6例，占31．6％；12例＞SO岁初治组中，＊礼”9例，占75呢，高于＜so岁组（P＜0．05）。19例＜50岁初治组中P－gPSB”5例，占26．3％；12例3so岁初治组中P一切表达“6《，占50％，与＜so岁组无差异（P＞0．05）。19例＜50岁初治组中 3例 P－gPto能”，占 15．8％；12例 ＞50岁初治组中 7例 P－gPa＠”，占 58．3助，高于＜50岁组（P＜0．05）。 ·3· 五、CD。”、CD。一两组中P－gp表达、功能 19例 CD。”组中 P－gp＄。＼ 例，占 52．6呢；31例 CD。一组中P－gPSB”3例，占 9．7呢，低于 CD卫”组（P＜0．of）。19例 CD。”组中P一部功能＼10例，占52．6％，31例CD。一组中P－W①％”4例，占12．9畅，低于＊＊。”组（P＜O．01）。 讨 论 白血病细胞?