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苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt），是一种革兰氏阳性菌，能够在芽胞期产生伴胞晶体蛋白。由于其具有对非靶标害虫无毒无害、对环境安全等特点，已经广泛应用于双翅目、鳞翅目和鞘翅目害虫的防治。随着转Bt作物的大面积种植，害虫的抗性问题日益严重，蛋白之间的协同增效有助于此问题的解决。本论文围绕Cry9Aa蛋白的可溶性改造、最小活性区、纯化最优条件的筛选、寡聚化的影响、Cry9Aa蛋白和Vip3Aa蛋白N端酶切断裂点分析，以及它们之间的增效机理等方面进行了研究。 cry9Aa3基因，是本实验室克隆，对多种鳞翅目害虫有较高活性，Cry9Aa蛋白在Bt无晶体突变体中不表达，而在大肠杆菌中主要是以包涵体的形式存在，上清中表达量极低。本研究通过两个途径对该蛋白进行了改造：（一）通过 BP和RecA重组将Cry9Aa的核心区和Cry1Ac的C末端所对应的基因片段融合，构建融合基因 cry9AaAc，转入 HD73无晶体突变株，镜检阳性克隆菌株，无晶体产生，SDS-PAGE分析菌株总蛋白，未检测到目标蛋白；（二）根据Cry9Aa蛋白信息学分析结果设计了11个截短位点，SDS-PAGE分析各截短蛋白上清表达量，发现Cry9Aa3-1～654、Cry9Aa3-1～655蛋白上清表达量显著提高。 通过Cry9Aa各截短蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟的活性分析，发现Cry9Aa对小菜蛾和亚洲亚洲玉米螟的最小活性区相同，均位于45I和654V之间。 通过研究Binding buffer中咪唑和NaCl浓度对Cry9Aa蛋白纯化的影响，最终筛选出咪唑浓度为50 mmol/L，NaCl浓度为500 mmol/L为最优纯化条件。通过研究不同pH值、NaCl浓度与Cry9Aa蛋白寡聚化之间的关系，明确了高pH值和NaCl浓度能够抑制该蛋白的寡聚化，通过研究DTT对寡聚化的影响，确定了该蛋白的寡聚化是由分子间二硫键介导的，从而筛选出此蛋白单体稳定存在的条件是缓冲液必须有1 mmol/L的DTT存在。 通过Cry9Aa和Vip3Aa蛋白对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和水稻二化螟的中肠液的消化试验，发现Cry9Aa蛋白消化后有约60 kDa片段产生，Vip3Aa蛋白有约62 kDa片段产生。通过N端测序和质谱技术，得出Cry9Aa蛋白的酶切片段的N端断裂点位于23K与24Y之间，Vip3Aa蛋白的酶切片段的N端断裂点位于39K与40T之间。 通过两种蛋白对水稻二化螟的生测，验证了纯化的Cry9Aa和Vip3Aa蛋白的组合对水稻二化螟的增效作用高达35.7。通过配体垂钓初步分析了它们的受体，发现它们都有相同的受体氨肽酶，也存在其它不同的结合蛋白。