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为了研究Ghrelin在体内长期的生理效应,该研究构建了包含猪Ghrelin成熟肽cDNA肌原表达载体(pGEM-wt-sGhln、pGEM-wt-hGhln),N-端第三位丝氨酸突变为色氨酸(Ser<3>-Trp<3>)猪Ghrelin突变体cDNA肌原表达载体(pGEM-mt-sGhln、pGEM-mt-hGhln)及猪Ghrelin短肽类似物cDNA肌原表达载体(pGEM-tmt-sGhln、pGEM-tmt-hGhl).结果表明,在直接质粒DNA注射方法中,Ghrelin本身的信号肽/导致的效果优于hGHRH的信号肽/导肽;骨骼肌似能对表达出的Ghrelin具有翻译后辛酰化修饰能力;Ghrelin短肽类似物的生物活性效力可能比Ghrelin成熟肽更高.此外,联合注射pGEM-wt-sGhln & pGEM-wt-hGHRH(含hGHRH cDNA)也促进大鼠增重5个多星期,最佳效果也出现在注射后14天,平均增重比对照组高15％(76.71±4.17g vs 66.96±4.57g,p<0.05),这些结果表明在基因药物方法上,Ghrelin与GHRH在此系统中具有协同刺激生长的作用,初步证实了利用肌肉特异载体异位表达Ghrelin、Ghrelin短肽类似物及合并表达Ghrelin与GHRH在促进大鼠生长上是可行的.为了进一步验证载体pGEM-wt-sGhln、pGEM-tmt-sGhln的促生长效力和增强基因导入效率,在进一步的动物实验中,优化了实验设计,利用Q sepharose XL阴离子交换柱对质粒DNA进行了纯化,并采用布比卡因预处理.结果进一步证实了我们以前的推论:注射编码Ghrelin成熟肽的载体,pGEM-wt-sGhln,能够有效促进大鼠生长达30天,表明骨骼肌似乎能够对在肌肉组织表达的Ghrelin具有行使翻译后修饰能力.而注射编码Ghrelin短肽衍生物载体,pGEM-tmt-sGhln ,也能强烈刺激大鼠生长达30天,表明Ghrelin N-端是其生物活性的"核心",其短肽衍生物能够模拟全长Ghrelin的空间结构及生理效应.综合我们的实验结果表明,进一步提高质粒表达载体转移效率,增强目的基因的表达,利用直接质粒DNA转移方法促进生长将来可以应用到家畜生产实践,甚至,人类临床基因补充和替代治疗.