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为了获得无花粉的百合新材料,解决百合花药污染问题,本研究从新铁炮百合(Lilium longiflorum×L. formosanum)、亚洲百合(Asiatic hybrid lily)和东方百合(Oriental hybrid lily)中各选一个品种,分别为‘L-1’、‘A-1’和‘O-1’为试材,对百合再生体系和遗传转化体系的建立进行了探索。
以小鳞片为外植体,建立了上述三个百合品种的再生体系。新铁炮百合和亚洲百合在附加1.0mg/L 6-BA和1.0 mg/L NAA的MS基础培养基上诱导培养,再生率达100%,每个外植体再生的不定芽数分别为6.6和4.3;不定芽适宜的生根条件为1/2MS+0.2 mg/L NAA。东方百合小鳞片不定芽分化的最适培养条件为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽诱导率为100%,平均每个外植体再生的不定芽数为3.5,不定芽在MS+0.1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基上生根情况较好。
探讨了四种抗生素,即Hyg、G418、Kan和Cef对三个百合品种小鳞片不定芽分化和生长的影响;两种抑菌抗生素,即Cef和Carb对根癌农杆菌的抑制效果;同时还探讨了Kan对新铁炮百合不定芽生根的影响。在此基础上,确定了各个品种遗传转化中适宜的抗生素种类和浓度。结果表明,75 mg/L的Kan对小鳞片不定芽的分化具有很好的筛选效果,抑菌抗生素Cef的适宜浓度为250mg/L,生根筛选时Kan的使用浓度为15 mg/L。
通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将ZM401基因导入新铁炮百合中。遗传转化中,外植体经预培养3 d,侵染5 min,共培养5 d,获得了12‰的转化率。以此方法用玉米(Zea Mays L.)花药发育相关基因ZM401转化受体材料,经PCR和PCR-Southern检测证实,ZM401已经成功地整合到转化植株基因组中。
本研究建立了新铁炮百合、亚洲百合和东方百合的再生体系和受体再生体系,进行了新铁炮百合的遗传转化,获得ZM401转化植株,为获得无花粉百合中间材料奠定了基础。