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牛冠状病毒（BCV）、牛轮状病毒（BRV）是引起犊牛传染性腹泻的主要病毒。犊牛感染后导致免疫功能下降、引起严重腹泻、脱水造成大批死亡。因此,研发用于规模化牛场中快速诊断BCV、BRV抗体的间接ELISA方法尤为重要。目的:（1）对新疆北疆部分地区和南疆部分地区规模化牛场进行犊牛轮状病毒、冠状病毒病的调查分析。（2）建立一种快速诊断犊牛冠状病毒、轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。方法:从新疆北疆地区和南疆部分地区规模化牛场采集腹泻犊牛粪便、肠道内容物共172份,采用ELISA和PCR方法同时进行犊牛轮状病毒的检测。同时为了解新疆北疆部分地区规模化牛场犊牛冠状病毒病感染情况;采集10个规模化奶牛场141份腹泻犊牛粪样,采用PCR和ELISA同时进行检测。（2）对犊牛轮状病毒内衣壳蛋白VP6保守区设计并合成引物,构建重组表达载体pET-32a-VP6,表达牛轮状病毒VP6蛋白,应用Western Blot分析该蛋白的免疫反应性,建立BRV间接ELISA诊断方法;同时依据GenBank登录的犊牛冠状病毒N基因序列,设计特异性引物,构建重组表达载体pET-32a-N,然后亚克隆入BL21（DE3）表达载体,用IPTG进行诱导和SDS-PAGE鉴定重组菌,Western blot分析表达产物。建立检测犊牛冠状病毒抗体的间接ELISA方法,用建立好的牛轮状病毒、冠状病毒间接ELISA的方法与进口的比利时瑞尔检测试剂盒对采集的新疆北疆部分地区10个规模化牛场的腹泻犊牛血清26份和部分健康犊牛血清进行比较。结果:（1）检测172份样品中,ELISA检测结果显示检测出犊牛轮状病毒阳性100份,阳性率58.13%,PCR检测结果127余份,阳性率73.83%;检测141份样品中,ELISA检测结果显示检测出犊牛冠状病毒阳性份数99份,阳性率70.21%,PCR检测结果87份,阳性61.7%。（2）利用PCR方法成功扩增出目的基因,经过测序与酶切鉴定,构建了pET-32a-VP6表达载体,SDS-PAGE电泳显示表达产物在60kD表达重组蛋白。经过Western Blot检测,该蛋白具有良好的免疫反应性,建立的间接ELISA诊断方法与进口试剂盒符合率达到92.3%;同时成功克隆了牛冠状病毒N基因,片段大小为1400 bp,重组蛋白BCV-32a-N-DE3相对分子质量为70 kD,Western blot分析表明该重组蛋白BCV-32a-N-DE3可以与牛冠状病毒阳性血清发生特异性反应。建立的检测犊牛冠状病毒抗体的间接ELISA诊断方法与进口试剂盒符合率达到88.46%,健康犊牛血清均不发生反应。结论:（1）应用PCR和ELISA方法对新疆北疆部分地区和南疆部分地区规模化牛场中致犊牛腹泻主要病原轮状病毒、冠状病毒进行了调查,发现有较高的感染率,对规模化牛场采取积极的防控提供依据。（2）建立了快速诊断犊牛轮状病毒、冠状病毒抗体的间接ELISA方法,对规模化牛场中犊牛轮状病毒和冠状病毒感染进行筛查。