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胶原蛋白是细胞外基质中最重要的组成部分,是一种无支链的纤维型蛋白质,其成品为白色、不透明。分子量约300KDa,由三条α链相互盘绕成螺旋结构。胶原蛋白在动物细胞中的作用是结合机体组织,水产无脊椎动物比如鱼类中大量存在的胶原蛋白的类型是类I型和类V型,所起的作用与脊椎动物体内的I型胶原蛋白相当。壳聚糖(Chitosan)又名几丁聚糖,是甲壳素的乙酰化反应后的产物,是具有一定得光泽,半透明的片状固体,壳聚糖在水和碱中不溶,具有良好生物相容性、安全性和生物降解性的阳离子聚合物。目的制备鱼皮胶原蛋白/壳聚糖复合物,对它的理化性质,在体外对黑色素合成的影响以及体内抗氧化活性进行考察。方法1.以鱼皮胶原蛋白为模式药物,采用离子凝胶化法制备胶原蛋白/壳聚糖复合物,扫描电镜观察复合物的形态,利用差示扫描量热以(DSC),X射线衍射仪(XRD),傅里叶红外变换红外光谱仪(FTIR)检测复合物理化结构。2.试剂盒法检测小鼠血清中MDA含量和红细胞SOD活力,以此来检测复合物对小鼠抗氧化活性的影响。3.以小鼠B16黑色素瘤细胞为模型,研究不同浓度的胶原蛋白和鱼皮胶原蛋白/壳聚糖复合物对黑色素瘤细胞中黑色素生成的影响,利用酶标仪测定黑色素含量;根据外文文献检测酪氨酸酶活性;通过RT-PCR法检测酪氨酸酶mRNA的表达情况。结果1.成功制备得到鱼皮胶原蛋白/壳聚糖复合物,SEM,DSC,XRD,FTIR的数据验证了这一结果。2.小鼠体内抗氧化活性实验表明,复合物能够显著地降低小鼠血清中MDA含量和提高红细胞SOD活力,表现出良好的抗氧化活性。3.以小鼠B16黑色素瘤细胞为模型的药效学实验表明,本课题制备得到的复合物能够减少小鼠B16黑色素瘤细胞中的黑色素产生量,降低细胞中酪氨酸酶的活性,同时能够降低酪氨酸酶的mRNA表达。结论本课题利用离子凝胶化法成功制备了鱼皮胶原蛋白/壳聚糖复合物,经一系列的实验研究表明,该复合物具有良好的体内抗氧化活性,同时具有抑制细胞黑色素生成,降低酪氨酸酶的活性和抑制酪氨酸酶的mRNA表达的作用。