第一章：N-甲基-D-天冬氨酸2B亚基在慢性内脏痛大鼠脊髓中枢敏化中的作用　　 目的：本章节旨在观察N-甲基-D-天冬氨酸2B亚基（NR2B）对慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性的影响并探讨其脊髓作用机制，为开发其治疗药物提供新的作用靶点与思路。　　 方法：选用新生SD大鼠，出生后8～14d内，每天固定时间给予一次60mmHg压力的结直肠刺激（CI）建立IBS慢性内脏痛模型，对照大鼠除了不行CI外，其他情况同模型大鼠。大鼠成年后采用测量腹外斜肌对结直肠扩张的放电反应来评估肠道痛觉的敏感性。鞘内分别给予25～150μg Ro 25-6981（NR2B选择性拮抗剂）或0.1～1.0mg genistein（酪氨酸激酶拮抗剂），观察其对模型大鼠内脏痛敏反应的影响；采用western blot方法观察比较NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在模型大鼠脊髓腰骶段的表达情况；并且观察比较鞘内给予上述拮抗剂后是否影响其表达。　　 结果：　　 1.慢性内脏痛模型大鼠的特点　　 ①模型大鼠内脏痛敏反应显著高于对照大鼠。②模型大鼠远端降结肠及直肠局部组织未见明显病理改变。　　 2.Ro 25-6981对慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性的影响　　 鞘内注射Ro 25-6981可剂量依赖性显著降低慢性内脏痛大鼠内脏痛敏反应，且最佳作用时间约为给药后0.5 h。　　 3.Genistein对慢性内脏痛大鼠痛觉敏感性的影响　　 鞘内注射genistein可剂量依赖性显著降低慢性内脏痛大鼠内脏痛敏反应，且最佳作用时间约为给药后1h。　　 4.NR2B在慢性内脏痛大鼠脊髓中的表达情况　　 通过western blot的方法观察结果显示，NR2B在慢性内脏痛大鼠脊髓腰骶段的表达显著高于正常大鼠；且慢性内脏痛大鼠鞘内给予高剂量Ro 25-6981后NR2B表达未见明显改变。　　 5. Tyr-1472磷酸化NR2B在模型大鼠脊髓中的表达情况　　 通过western blot的方法观察结果显示，Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性内脏痛大鼠脊髓腰骶段的表达显著高于正常大鼠；且慢性内脏痛大鼠鞘内给予高剂量Ro 25-6981或genistein后，Tyr-1472磷酸化NR2B的表达均显著下降。　　 结论：　　 NR2B可能是通过激活其酪氨酸1472位点的磷酸化而参与慢性内脏痛脊髓中枢敏化的形成，有望成为慢性内脏痛药物治疗的新靶点。　　 第二章：N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基在慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP中的作用　　 目的：本章节旨在观察海马场电位长时程增强（LTP）在慢性内脏痛大鼠中枢敏化中的作用，及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）在其中的作用及机制。　　 方法：选用新生SD大鼠，出生后8～14d内，每天固定时间给予一次60mmHg压力的结直肠扩张刺激建立IBS慢性内脏痛模型，对照大鼠除了不行结直肠扩张刺激外，其他情况同模型大鼠。大鼠成年后通过测量腹外斜肌对结直肠扩张引起的放电反应来评估肠道痛觉的敏感性。采用离体脑片场电位的记录方法，观察慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP，并在离体海马脑片ACSF灌流液中加入0.25～1.0mg/L Ro 25-6981或2.5～10mg/L genistein后，观察不同浓度Ro 25-6981或genistein对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响；同时采用western blot方法观察比较NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性内脏痛大鼠海马的表达情况。　　 结果：　　 1.慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的变化　　 慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP峰值及斜率与正常大鼠相比较均显著增加。　　 2.Ro 25-6981对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响　　 慢性内脏痛大鼠离体海马脑片ACSF灌流液中加入Ro 25-6981可剂量依赖性显著降低海马场电位LTP的峰值及斜率。　　 3.Genistein对慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的影响　　 慢性内脏痛大鼠离体海马脑片ACSF灌流液中加入genistein可剂量依赖性显著降低海马场电位LTP的峰值及斜率；　　 4.NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性内脏痛大鼠海马中的表达情况　　 通过western blot的方法观察结果显示，NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性内脏痛大鼠海马的表达与正常大鼠相比较均显著增加。　　 结论：　　 1.海马场电位LTP的易化可能参与慢性内脏痛中枢敏化的形成过程。　　 2.NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B可能参与慢性内脏痛大鼠海马场电位LTP的易化过程。