目的乳腺癌(Breast cancer)是世界最常见的恶性肿瘤之一。世界范围内发病率呈逐年增高趋势。在我国乳腺癌发病率也增速明显,尤其在大城市其发病率甚至成为妇女发病率第一的恶性肿瘤。经过多年的研究,虽然乳腺癌诊断的研究进展有很大提高,但是如何准确评估乳腺癌预后及为临床治疗方案提供可靠依据还不够理想。1971年,人们发现了在部分乳腺癌细胞中,存在雌激素受体(ER)。在此后长期的跟踪研究中发现,ER在乳腺癌中的过表达与乳腺癌的发生有一定的相关性。孕激素受体(PR)是雌激素和雄激素受体结合诱导的产物。PR在孕激素存在的情况下,可显著抑制乳腺癌细胞株的生长,抑制肿瘤细胞的浸润和转移。PR阳性意味着内分泌治疗有效率高,预后较好。CerbB-2是目前发现的与乳腺癌关系最密切的一种原癌基因。CerbB-2正常情况下处于非激活状态,当受到内外界因素的影响而激活时,则可通过基因扩增和蛋白过度表达,刺激细胞增殖、浸润和转移。所以细胞表面CerbB-2过度表达则具有肿瘤转化活性。P53抑癌基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基因,在正常状态下能抑制肿瘤发生。P53蛋白分为野生型和突变型,其突变型不但失去了对细胞增殖和分化的负调控作用,而且还能正向激活某些促生长基因的表达,从而促进细胞增殖导致肿瘤发生。P16是一种重要的抑癌基因。当P16发生缺失,突变、转录和表达异常时,P16蛋白合成障碍引起细胞增殖的失控,导致肿瘤的发生。上述结果表明ER, PR、CerbB-2、P53、P16在乳腺癌组织中各自的过表达都与乳腺癌的预后有关。但单一检测这些指标往往有一定的局限性。因此,本实验检测乳腺癌组织蜡块中ER, PR、CerbB-2、P53、P16的表达水平,分析它们在乳腺癌组织中表达水平与乳腺癌病理类型、组织学分级、肿瘤转移、患者年龄、肿瘤大小的相关性,探讨联合检测ER, PR、CerbB-2、P53、P16对乳腺癌诊断和判断预后的意义。HER-2基因的扩增是乳腺癌CerbB-2蛋白过表达的主要机理。明确HER-2基因状况对于评估乳腺癌患者预后十分重要,并有助于指导有乳腺癌转移和HER-2扩增的病人进行Herceptin治疗。HER-2检测方法很多,对于乳腺癌患者检测HER-2状态最好手段的选择成了人们研究的热点。免疫组化法(IHC)是针对HER-2的特异性抗体来检测细胞表面HER-2蛋白的表达情况。在检测过程中其结果易受到多种外界因素的影响,但不可否认的是IHC简便、价廉、可重复性好、对材料的要求不高,在临床上可以广泛应用。荧光原位杂交(FISH)是用于检查17号染色体着丝粒和HER-2基因扩增情况的乳腺癌诊断新技术,是目前被公认为检测HER-2基因过表达的金标准。但是FISH的检查成本过高和实验条件要求严格成为其不能在临床上广泛开展的原因.本组实验拟探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测石蜡标本乳腺癌Her-2基因和免疫组化法(IHC)检测CerbB-2蛋白表达结果的相关性。以找出检测Her-2状态最好的方式。材料与方法1.收集乳腺癌患者术后切除组织蜡块做为实验对象,患者术前均未接受放疗或化疗的治疗。2.用免疫组织化学二步法检测乳腺癌组织蜡块中ER、PR CerbB-2、P53、P16的表达水平。3.分析组织表达水平与乳腺癌病理类型、组织学分级、肿瘤转移、患者年龄、肿瘤大小的相关性。4.收集乳腺癌患者术后切除组织蜡块做为实验对象,患者术前均未接受放疗或化疗的治疗。5.采用免疫组织化学二步法检测乳腺癌组织中CerbB-2的表达水平。6.用荧光原位杂交法检测HER-2基因的扩增情况。7.对两种检测方法的结果进行对比。结果1.ER、PR阳性表达与乳腺癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移、年龄、肿瘤大小之间无相关性。2.乳腺癌组织分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中,ER的阳性表达率分别为(68.75%)、(63.95%)、(60.61%),PR的阳性表达率分别为(75.00%)、(65.12%)、(57.58%)。二者都随组织学分级的升高而降低。3.在不同病理类型乳腺癌中CerbB-2的阳性表达无统计学意义。4. CerbB-2在有淋巴结转移的乳腺原发灶中的阳性率为78.57%,明显高于无淋巴结转移者的乳腺原发灶中的阳性率55.00%,差异具有统计学意义。5.乳腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级CerbB-2的阳性率分别是43.75%、47.77%、77.27%有统计学意义。CerbB-2随着细胞分化逐渐变差,其表达逐渐升高。6. CerbB-2的阳性表达率与肿瘤大小有关,随着肿瘤大小增加,其阳性表达率增高。7.ER和PR表达与CerbB-2呈负相关。8.本组病例中P53的表达与乳腺癌病理类型、组织学分级、患者年龄、肿瘤大小无明显关系。9.P53在有淋巴结转移的乳腺原发灶中的阳性率明显高于无淋巴结转移者的乳腺原发灶中的阳性率,差异具有统计学意义。10.本组病例中P16的表达与乳腺癌病理类型、组织学分级、患者年龄、肿瘤大小无关明显关系。11.P16在有淋巴结转移的乳腺原发灶中的阳性率为,明显低于无淋巴结转移者的乳腺原发灶中的阳性率,差异具有统计学意义。12. CerbB-2蛋白阴性和弱阳性表达者HER-2基因均无扩增。13. CerbB-2蛋白呈(++)和(+++)表达的样本中,HER-2基因有扩增但仍然有一部分HER-2基因无扩增。结论1.检测乳腺癌患者ER、PR、CerbB-2、P53、P16水平可以发现,根据ER、PR、CerbB-2、P53、P16的表达情况判断乳腺癌的病理类型意义不大。2. CerbB-2或P53阳性表达、P16阴性表达均提示患者可能已有淋巴结转移预后差。3.使用ER、PR、CerbB-2联合检测是指导内分泌治疗的重要指标。4. CerbB-2阳性的乳腺癌提示恶性程度高,预后差。5.免疫组化法操作简便、价格低廉的特点,可以用作临床化疗是否应用Herceptin的初筛。开展FISH技术检测HER-2基因作为IHC的补充,可避免使IHC假阳性患者接受Herceptin过度治疗所带来的不必要的经济负担和药物毒副作用的损害。