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肝移植已成为终末期肝病的有效治疗手段,但是移植排斥反应仍是影响移植病人长期存活的重要原因之一,而寻找诱导免疫耐受的新方法,是克服移植排斥反应的最佳途径,因而具有重要意义。在诱导移植免疫耐受的方法中,共同刺激信号途径受到人们越来越多的关注,已逐渐成为免疫学研究的一个热点领域。在共刺激通路中,PD-I/PD-L信号途径被认为与移植排斥反应密切相关,但近年来单通路共刺激阻断并不能取得理想的诱导免疫耐受结果,较多的学者也认为同时阻断多个共刺激通路能更好的诱导免疫耐受。CD40-CD40L通路是继CD28通路之后又一受到重视的共刺激通路,研究表明PD-1/PD-L通路和CD40-CD40L通路之间有功能交互作用。本实验在建立稳定的大鼠肝移植模型基础上,探讨PD-LIIg联合抗CD40L单抗对大鼠肝移植诱导免疫耐受的影响。第一部分大鼠原位肝移植模型的建立目的构建稳定的大鼠原位肝移植动物模型,探讨成功构建实验模型的要点。方法采用健康清洁成年Wistar和SD大鼠,用Kamada二袖套法建立Wistar-SD大鼠原位肝移植模型。结果大鼠肝移植20次实验中,16例术后存活超过7天,手术成功率为80%,符合本实验的要求。余4只术后存活未能超过7日,其中1例由于麻醉意外死亡,1例死于肠梗阻,2例死于肝上下腔静脉吻合口出血。术后7天处死5只大鼠行肝组织病理学检查汇管区可见大量混合炎性细胞浸润,小叶间静脉下炎细胞浸润,胆管损伤,肝细胞出现肿胀坏死。结论娴熟的外科手术操作,术中细节的注意以及及时的补救措施可延长大鼠存活时间,建立稳定的肝移植模型,可行免疫耐受的研究。第二部分PD-L1lg联合抗CD40L单抗诱导大鼠肝移植免疫的实验研究目的探讨PD-L1Ig联合抗CD40L单抗诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用。方法移植后动物分为4组,A组对照组、B组PD-L1Ig组、C组抗CD40L单抗组、D组PD-L1Ig+抗CD40L单抗组,其中对照组不给予任何药物,B组给予PD-L1Ig0.1mg/kg,C组给予抗CD40L单抗0.2mg／kg,D组给予PD-L1Ig 0.1mg／kg和抗CD40L单抗0.2mg／kg,分别在手术当天、第二天、第四天及第六天重复给予腹腔内注射,观察动物生存情况、精神、进食,术后一周处死部分动物取肝脏及血标本。血清酶学检测血肝功、流式细胞仪检测肝细胞凋亡,取肝组织行HE染色评价排斥反应严重程度。结果术后PD-LlIg+抗CD40L单抗联用组中位数存活时间为24天明显长于抗CD40L单抗组、PD-L1Ig组和空白对照组,结果具有统计学意义(P<0.05),抗CD40L单抗组、PD-L1Ig组中位数存活时间为14天长于空白对照组中位数存活时间7天,结果具有统计学意义(P<0.05),抗CD40L单抗组与PD-L1Ig组相比无统计学意义(P〉O.05)；术后对照组谷丙转氨酶、谷草转氨酶及总胆红素指标均比联用组、抗CD40L单抗组、PD-L1Ig组高,两组相比有统计学意义(P<0.05),PD-L1Ig+抗CD40L单抗组要低于抗CD40L单抗组、PD-L1Ig组,两组相比有统计学意义(P<0.05),抗CD40L单抗组与PD-L1Ig组两组相比无统计学意义(P>0.05)；对照组,在术后7天行移植肝HE染色检查发现：汇管区可见大量混合炎性细胞浸润,血管、胆管损伤,肝细胞出现肿胀坏死；抗CD40L单抗组、PD-L1Ig组,移植肝HE染色检查发现：术后7天,可见汇管区大量炎性细胞浸润,轻度静脉内皮炎,胆管轻度损伤；PD-L1Ig+抗CD40L单抗组病理学检查发现：炎细胞浸润少数汇管区的胆管和血管,炎细胞数量较少。参照Banff分级标准,PD-L1Ig+抗CD40L单抗组为轻度排斥,PD-L1Ig组、抗CD40L单抗组为中度排斥,对照组为重度排斥。流式细胞仪检测肝细胞凋亡显示,PD-L1Ig+抗CD40L单抗组移植肝凋亡率要低于抗CD40L单抗组、PD-L1Ig组和空白对照组。结论：1.PD-L1Ig联合抗CD40L单抗对减轻移植术后排斥反应要优于单用PD-L1Ig或抗CD40L单抗。2.PD-L1Ig联合抗CD40L单抗较单用可延长移植后大鼠生存时间,而且联和用药组移植术后肝功能要好于单用药组。3. PD-L1Ig联合抗CD40L单抗较单用可减少大鼠肝移植术后肝细胞凋亡。