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目的对于分期较晚不考虑外科治疗的宫颈癌患者,主要的治疗手段之一是放疗。肿瘤细胞对射线杀伤是否敏感直接决定了疗效和疾病预后。DNA修复蛋白与肿瘤的放射敏感性关系密切。TPX2主要在胞核中起作用,依赖细胞周期并受其调节,与有丝分裂中纺锤体的准确合成及结构稳定有直接关系。TPX2基因异常表达直接产生的结果是中心体出现反常扩增及异倍体形成,同时与肿瘤转移和复发明显相关。已有研究证实了射线依赖的?-H2AX形成量与DNA双链断裂点的数量之间有相关关系。最新的研究发现胞内TPX2蛋白发生不同程度的消耗时,射线诱导的?-H2AX的数量会呈现短暂增加的现象。本实验主要利用RNAi技术,设计合成靶基因TPX2的小干扰RNA,观察导入si RNA后HeLa细胞中TPX2 mRNA和蛋白表达的改变,以及HeLa细胞放射敏感性的变化,为宫颈癌的放射增敏提供了研究方向。方法选择人宫颈癌HeLa细胞,根据小干扰RNA设计原则设计靶基因TPX2的si RNA,共设计3对分别为si RNA-1、si RNA-2和si RNA-3,同时设计阴性对照si RNA。利用ribo FECTTMCP转染试剂,将si RNA转染入HeLa细胞,对转染后各组细胞内TPX2 mRNA和蛋白质的表达情况进行观察。主要采用RT-PCR、Western Blotting法,于转染后48 h进行,提取总RNA和总蛋白后检测TPX2 mRNA和蛋白表达情况,并筛选出最佳转染组及最佳转染时间。实验分组:目的基因组、阴性对照组、空白对照组。利用ribo FECTTMCP将si RNA转染入宫颈癌HeLa细胞中进行4 Gy-X线照射,利用CCK8法和流式细胞术观察TPX2表达下调的HeLa细胞对射线的敏感性的改变。结果转染48 h后提取总RNA,利用RT-PCR观察转染后各组细胞TPX2 mRNA的相对表达量发现,转染针对靶基因TPX2的si RNA的各组细胞均表现出TPX2基因表达抑制效应,以si RNA-2效果最明显,其TPX2的相对含量为(0.133±0.008)与空白对照组(1.000)及阴性对照组(0.981±0.814)相比有统计学意义(P<0.05)。转染后继续培养48 h,用Western Blot法检测HeLa细胞TPX2蛋白的表达。结果发现si RNA-2组TPX2蛋白表达明显降低,蛋白相对含量为(0.518±0.685),空白对照组为(1.064±0.794),阴性对照组为(0.981±0.814),si RNA-2组与阴性对照组及空白对照组比较,有统计学意义(P<0.05)。HeLa细胞放射敏感性的检测:转染后给予4 Gy X线照射,(1)利用CCK8检测各组细胞OD值,并计算细胞增殖活力,沉默TPX2组为(0.147±0.003),阴性对照组为(0.224±0.009),空白对照组为(0.353±0.012),统计学分析得出F=9.243,P=0.0015,差异有统计学意义(P<0.05);(2)用流式细胞术检测各组细胞凋亡率发现各组细胞均出现凋亡增加,其中沉默TPX2组细胞凋亡率为(12.68±0.03%),阴性对照组为(9.37±0.11%),空白对照组为(5.81±0.21%),进行单因素方差分析,F=10.242,P<0.0001,差异有统计学意义(P<0.05)。结论针对靶基因TPX2的si RNA成功转染HeLa细胞,并能发挥基因表达的特异性抑制作用,目的基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时可以提高HeLa细胞的放射敏感性。