论文部分内容阅读
研究背景外周T细胞淋巴瘤是一组异质性强,临床表现和生物学行为都极具侵袭性的恶性肿瘤,约占非霍奇金氏淋巴瘤的15%,且亚洲人群发病率高于西方国家人群。该组疾病对传统CHOP化学疗法反应不佳,疗效差,长期生存率低。外周T细胞淋巴瘤的新型疗法亟待被提出。目前,国内外研究结果显示Syk基因在B细胞淋巴瘤中过表达,且Syk口服抑制剂已被研发,目前已投入临床应用。故而Syk的过表达是否与外周T细胞淋巴瘤的发生发展有关,且能否成为其治疗的一个新靶点成为了研究热门。本课题组前期研究结果显示,Syk基因在正常外周T淋巴细胞中表达缺失,而在外周T细胞淋巴瘤中的表达增加,且收集的临床标本中,其免疫组织化学结果显示Syk蛋白的表达在大部分组织中呈阳性,与国内外的研究结果一致。本实验继续深入研究外周T细胞淋巴瘤中Syk基因的作用,从细胞生物学行为揭示Syk基因对外周T细胞淋巴瘤细胞的影响。研究目的探讨siRNA抑制脾酪氨酸激酶(Syk)基因后对外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78细胞增殖与凋亡的影响。研究方法1、针对Syk基因特异靶点设计3条siRNA(siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3),采用电穿孔法转染外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78,同时设Mock组(即空白对照组)和siRNA-NC组(即阴性对照组);2、转染48 h后,分别用RT-PCR和Western blot技术检测Syk m RNA和蛋白的表达水平,筛选出最有效的Syk siRNA;3、Syk siRNA转染HUT-78后分别用软琼脂克隆形成实验检测Syk下调后HUT-78细胞的克隆形成能力,MTT法检测干扰24,48,72 h后细胞增殖情况,流式细胞术检测Syk下调后HUT-78细胞的凋亡情况。研究结果1、RT-PCR和Western blot的结果显示,与Mock组和siRNA-NC组相比,3条siRNA均能有效降低HUT-78细胞中Syk m RNA和蛋白的表达,其中Syk siRNA-1抑制效果最明显。2、克隆形成实验显示,下调Syk基因表达后HUT-78细胞的克隆形成能力与Mock组和siRNA-NC组相比明显下降(P<0.05);3、MTT实验结果显示,下调Syk基因表达后HUT-78细胞的增殖能力与Mock组和siRNA-NC组相比显著下降(P<0.05);4、流式细胞术结果显示,下调Syk基因表达后HUT-78细胞的凋亡比例约37%,明显高于Mock组和siRNA-NC组(P<0.05)。结论siRNA下调Syk基因表达后可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖、克隆形成,促进凋亡,推测Syk基因在外周T细胞淋巴瘤的发生发展中发挥重要作用,有可能成为外周T细胞淋巴瘤基因治疗的新靶点。