目的肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是肝癌中的主要类型，居于常见恶性肿瘤的第五位，在世界范围内肿瘤相关死亡中其致死率居第三位，尤其是在亚洲及非洲地区。流行病学研究显示乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是HCC的关键危险因子。在西方国家HCC主要来自于肝硬化。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类进化上保守的小非编码RNA分子，大约22个核苷酸长短，是从长约70至80个核苷酸的部分互补双链前体(pre-miRNA)加工而来。MiRNA主要通过与靶mRNA的3`端非编码区特异性互补结合来调节转录后水平基因的表达，在一系列生物学过程如细胞周期、细胞分化、增殖和细胞凋亡中发挥重要作用。MiR-96在多种肿瘤中表达上调，被认为有致癌作用。在HCC中miR-96的作用仍不明。最近的研究显示miR-96在HCC中异常表达，且与HCC的危险因素如HBV感染和酗酒相关。在HCC细胞系中研究发现miR-96表达上调。FOXO转录因子在哺乳动物细胞中是重要的抑癌基因，近来有证据表明FOXO转录基因家族是miRNA调节的对象。在子宫内膜癌中miR-96的表达明显上调，而miR-96的过度表达导致FOXO1(Forkhead box O1)表达下调。在乳腺癌中miR-96的表达也上调，进一步的研究表明miR-96可以在乳腺癌中通过靶向FOXO3a (Forkhead box O3a)的3`端非编码区来下调FOXO3a的表达。在此发现的基础上，我们推测miR-96能够影响HCC的生物学行为，并且在HCC中可能影响FOXO1和FOXO3a的表达，此实验目的就是为了验证此假设。方法从正常人肝组织中提取肝细胞进行原代培养，提取HepG2细胞及原代人肝细胞（primary human hepatocytes, PHHC）中的RNA，通过Taqman探针实时定量PCR来确定其中miR-96的表达水平。为了研究miR-96对HepG2细胞的生物学行为的影响，我们使用miR-96抑制剂（anti-miR-96）来抑制HepG2细胞中的miR-96表达水平。通过Taqman探针实时定量PCR来检测anti-miR-96的抑制效果。MiR-96在HepG2细胞的功能主要通过细胞增殖实验、细胞迁移实验、平板克隆形成、琼脂糖克隆形成实验及流式细胞仪检测细胞周期及凋亡来检测。应用生物信息学技术并结合SYBRGreen定量PCR、Western Blot分析miR-96对靶基因FOXO1及FOXO3a的作用。最后，我们使用siRNA抑制FOXO1和FOXO3a的表达来研究这两个基因对HepG2细胞的生物学行为的影响。结果与原代人肝细胞相比，miR-96在HepG2细胞中表达明显上调。在HepG2细胞中，anti-miR-96能显著抑制miR-96的表达。肿瘤细胞的恶性程度由其增殖、迁移及集落形成能力来反映。我们发现通过anti-miR-96下调miR-96的表达，可抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力。并且，与阴性对照组相比，转染anti-miR-96的HepG2细胞在软琼脂中形成的克隆更小更少，在平板克隆形成实验中得到同样的结果。这表明miR-96可促进HepG2细胞的恶性转化。在HepG2细胞中，抑制miR-96的表达，其靶基因FOXO1及FOXO3a的表达上调。使用siRNA抑制FOXO1及FOXO3a的表达则可促进HepG2细胞的增殖及克隆形成。而与FOXO3a相比，FOXO1的表达下调还可导致在软琼脂中形成更多更大的HepG2细胞克隆。结论MiR-96在肝癌细胞HepG2中显著上调，通过抑制靶基因FOXO1及FOXO3a的表达而促进HepG2的细胞增殖、迁移及克隆形成能力。这些发现表明miR-96的表达上调在肝癌的发生发展中起着重要作用，miR-96可以作为肝癌诊断治疗的一个新的分子靶点。