包覆罗丹明B的荧光硅纳米探针的研究与应用

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随着纳米科学和纳米技术领域的快速发展,各种形状、大小及不同组成的纳米粒子因其独特的光学性质以及其他的因特殊尺寸带来的优势而被广泛用于生物分子检测、生物成像等生物分析领域,并显示了广阔的发展前景。通过Stober方法将罗丹明B分子通过共价结合的方式成功地包覆在二氧化硅纳米粒子中,制备的荧光硅纳米粒子具有很好的水溶性、成像稳定性以及生物兼容性,其粒子大小约为60nm。荧光强度和罗丹明B分子相比提高了4000倍。对制备的荧光硅纳米粒子进一步进行了氨基、羧基及链霉亲和素的修饰,成功研制了可特异性结合生物素修饰蛋白质的纳米荧光检测探针;以反相蛋白质芯片检测为模型,研究了此探针对痕量蛋白质人IgE的检测性能。结果显示在40amol至640amol范围内,此纳米荧光探针具有良好的线性关系,最小检测量可达10amol。与商品化亲和素偶联Cy3荧光探针对比分析发现,本方法制备的荧光探针对蛋白质的检测灵敏度可提高8倍。并可应用于蛋白质微阵列芯片等高通量检测方法中,达到用于检测血清多个生物标志物的目的。荧光硅纳米粒子将有机染料分子包覆在二氧化硅阵列中,大大提高了荧光量子产率,因此荧光强度很高。金纳米粒子能够有效分辨不同构象的适配体,并且能够淬灭荧光硅纳米粒子。基于此将免标记的适配体、荧光硅纳米粒子以及金纳米粒子结合起来建立了高灵敏荧光检测腺苷的方法。在高离子强度的情况下,短链DNA (ss-DNA)能够吸附于金纳米粒子表面形成一层保护层,使金纳米粒子在溶液中保持良好的分散性。当加入目标分子腺苷时,ss-DNA便会与腺苷反应形成刚性的二级结构,从金纳米粒子表面解离下来,从而失去保护金纳米粒子抗盐团聚的作用,在0.2M盐离子浓度的情况下,金纳米粒子团聚,金对荧光硅纳米粒子的荧光淬灭能力降低,因此随着腺苷浓度的增大,测得的荧光强度也随之增大。适配体对腺苷的高亲和性能以及金纳米粒子对荧光硅纳米粒子的高淬灭性能大大提高了该方法检测腺苷的选择性和灵敏度。通过检测条件优化后,此检测方法在100nM到10μM的范围内具有良好的线性关系,检测限可达17n/m:与比色检测法或其他荧光传感法相比具有一定的优势。同时,该种检测方法并不仅限于检测腺苷分子,还能检测其他如凝血酶、可卡因等分子。只要当核酸适配体与目标物质发生特异性结合时,核酸适配体自身的构型会由原来的自由螺旋结构形成一些稳定的二级结构即可检测。该种高选择性和高灵敏的简单方法在基于适配体的临床应用方面拥有广阔的发展前景。
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