目的:构建TBX18慢病毒载体并在体外转染白色脂肪干细胞(ADSCs),观察其能否诱导ADSCs向起搏样细胞分化。方法:取50gSD大鼠双侧腹股沟脂肪,用酶消化法分离培养ADSCs,光学显微镜下观察细胞形态,将细胞随机地分为lenti-TBX18-GFP组(n=6)、lenti-GFP组(n=6)、null组(n=6),lenti-TBX18-GFP组转染同时携带TBX18转录因子和绿色荧光蛋白(GFP)的TBX18慢病毒载体,lenti-GFP组转染等量的GFP慢病毒作为空病毒对照组,null组不转染病毒作为空白对照组。一周后通过蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测三组相关转录因子TBX3、ISL1、SHOX2,缝隙连接蛋白CX45、CX43、CX30.2及心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白I(cTNI)、肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达量;通过免疫荧光技术检测lenti-TBX18-GFP组及lenti-GFP组的α-SMA蛋白的表达。病毒转染后第7天、14天、21天、28天分别采用实时荧光定量聚合酶链式反(RT-PCR)检测lenti-TBX18-GFP组及lenti-GFP 组 TBX18 及 HCN4 水平。结果:lenti-TBX18-GFP组转染ADSCs后,细胞形态发生改变,转染后4周内可通过荧光显微镜下观察到持续的荧光表达,诱导分化后,Western blotting显示lenti-TBX18-GFP 组 TBX3,ISL1,SHOX2,CX45,CX30.2,cTNI,α-SMA 蛋白水平升高,明显高于lenti-GFP组及null组;而Cx43与lenti-GFP组差异不大,但显著低于null组,;lenti-TBX18-GFP组免疫荧光检测到了α-SMA,而lenti-GFP组表达阴性;RT-PCR结果显示lenti-TBX18-GFP组TBX18及HCN4表达在慢病毒装染后4周内续表达,明显高于lenti-GFP组,具有统计学意义(P<0.05)。结论:TBX18慢病毒载体能够在体外转染入ADSCs,且能在细胞内稳定表达;能使ADSCs向起搏样细胞分化。