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目的 卵巢癌是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，其死亡率高居妇科恶性肿瘤之首。近年研究发现，成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）是一种强有力的细胞分裂促进因子，对成纤维细胞在内的多种细胞具有促进增殖和分化的功能，与肿瘤生长密切相关。FGF主要包括酸性FGF（aFGF）和碱性FGF（bFGF）。已发现FGF在肾细胞癌、膀胱上皮癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中均有过度表达，在卵巢癌中也发现存在高表达的bFGF及其受体，但在原发性卵巢癌中，尚未见有关aFGF与其发生发展关系的报道。本文采用RT—PCR技术和western blot方法，对40例上皮性卵巢癌组织中aFGF、bFGF及其受体FGFR1的表达进行了研究。 迄今为止，有关FGF在卵巢癌中的信号传导机制尚不清楚。本研究观察了aFGF和bFGF对卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖的促进作用及对细胞内蛋白激酶C（PKC）和细胞外信号调节激酶（ERK）活性的影响，并观察了ERK激酶MEK1抑制剂PD98059处理后PKC及ERK的变化趋势及对细胞增殖的影响，揭示FGF诱导卵巢癌细胞增殖的信号传导机制，并为通过阻断信号传导途径治疗卵巢癌提供实验依据。 材料与方法 1．RT—PCR法检测上皮性卵巢癌组织中aFGF、bFGF和FGFR1的表达；western blot方法检测上皮性卵巢癌组织中bFGF和FGFR1的表达。 2．细胞计数实验和MTT比色法观察aFGF、bFGF和PD98059对卵巢癌细胞系CAOV3细胞增殖的影响。 3.倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜、Hoechst 33258荧光染色观察PD98059处理后CAOV3细胞形态学的变化。 4.DNA梯度电泳、流式细胞术、TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）观察PD98059处理后CAOV3细胞的凋亡情况。 5.以不同浓度的aFGF、bFGF和pD98059诱导CAOV3细胞，利用[丫一’“P」ATP掺入外源性底物的方法，液体闪烁测定PKc及ERK活性的变化。实验结果 1.。FGF、bFGF和FGFR，在上皮性卵巢癌中的表达: RT一PCR及western blot结果提示aFGF、bFGF、FGFR，在卵巢癌及交界性肿瘤中均有过度表达，与正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤相比，差异有显著性;而在正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤中，以上三项指标则无显著差异。111一W期与I一fl期及交界性肿瘤比较，aFGF、bFGF、FGFRI表达水平均有显著升高（尸<0.05）;而I一且期及交界性肿瘤之间则无显著性差异。在FIGO分期相同的条件下，aFGF与bFGF、aFGF与FG-FRI及bFGF与FGFR;均具有相关性（尸<0.05）。以上三项指标在高、中、低分化卵巢癌中无显著差异，与肿瘤病理类型无关。 2.细胞计数法和Mrrr比色法结果均显示，随aFGF浓度升高，CAOV3细胞增殖比明显增加，且与aFGF浓度成剂量依赖关系（尸<0.05）;随bF-GF浓度升高，CAOV3细胞增殖比亦明显增加，bFGF浓度为75n扩ml时活性最强;加人PD98059后，CAOV3细胞增殖比明显下降，其下降程度随PD98059浓度增加而增加，PD98059对aFGF和bFGF诱导的细胞增殖的抑制作用更明显。 3.PD98059处理后，倒置相差显微镜下可见细胞密度明显降低，细胞间隙增宽，细胞缩小变圆，固缩成多个小亮点，高倍镜下见细胞内颗粒增多并可见空泡状改变。扫描电镜下见细胞体积明显缩小变圆，细胞表面微绒毛消失。透射电镜下可见细胞表面微绒毛显著减少，核内染色质聚集成块，边集，沿核膜内侧分布，核膜褶皱内陷，胞浆空泡样变。Hoechst 33258荧光染色见核内出现浓染、致密的颗粒状荧光的凋亡细胞。 4.PD98059处理后的CAOV3细胞DNA电泳可见清晰的阶梯状DNA条带。流式细胞仪分析见G，期前出现凋亡峰。TUNEL实验显示细胞核内出现棕褐色颗粒，提示为凋亡细胞。 5.aFGF、bFGF诱导后CAOV3细胞PKC及ERK活性变化: 随aFGF及bFGF浓度增高，PKC及ERK活性均明显升高，当bFGF浓度为75n留ml时，pKC和ERK活性达到峰值。 6.PD98059诱导后CAOV3细胞pKC及ERK活性变化: 加人抑制剂PD98059后，PKC及ERK活性均明显受抑制（P<0.05）。其抑制程度与PD98059浓度呈剂量依赖关系。PD98059对aFGF（或hFGF）诱导的细胞PKC及ERK活性的抑制作用更明显（P<0.05）。讨论 aFGF和bFGF是FGF家族中研究最多的2个成员，是促进细胞生长、分化、增殖的重要因子。从本实验的结果来看，aFGF、bFGF及FGFR，在卵巢癌及卵巢交界性肿瘤组织中均有过度表达，且111一W期与I一且期及交界性肿瘤比较，差异显著。以上结果表明，当发生癌变时，由于致癌因素的作用，使卵巢癌组织细胞中aFGF及bFGF基因活性增强，导致合成过量的aFGF和bFGF，而aFGF和bFGF又进一步引起卵巢癌组织内血管内皮细胞及毛细血管的形成，从而促进卵巢癌的生长。aFGF和/或bFGF表达的升高，激活其高亲和力受体FGFR，，通过与受体的结合而发挥作用。以上结果提示aFGF和bFGF可能以自分泌形式刺激卵巢癌细胞的异常分裂、增殖;以上三项指标与卵巢癌的发生、发展密切相关，可作为卵巢上皮癌生物学行为的重要指标。 本实验观察到，aFGF和bFGF均可促进卵巢癌细胞?