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【目的】验证Wnt/Lin28负向调控micro RNA-let-7a表达对食管鳞状细胞癌转移能力的影响并进一步探讨其相关作用机制。【方法】(1)定量PCR检测70例食管鳞癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织中micro RNA-let-7a、micro RNA-let-7b和micro RNA-let-7c的表达水平;琼脂糖凝胶电泳分别检测复发或者未复发食管鳞癌患者肿瘤组织与癌旁组织中micro RNA-let-7a的表达量;定量PCR检测复发和未复发食管鳞癌患者肿瘤组织与癌旁组织中micro RNA-let-7a的表达情况;(2)定量PCR检测人正常食管鳞状上皮细胞Het-1a及食管鳞癌TE-1、ECA109、KYSE-150细胞中micro RNA-let-7a的表达;通过细胞转染技术过表达或抑制micro RNA-let-7a后,CCK8法检测不同时间处理后食管鳞癌细胞增殖能力改变及Western blotting检测Ki-67表达;划痕实验和Transwell TM实验检测上调micro RNA-let-7a后ECA109细胞迁移、浸润能力的影响;(3)光学显微镜观察过表达或抑制microRNA-let-7a后ECA109和TE-1细胞形态学变化;免疫荧光及Western blotting法检测过表达micro RNA-let-7a后食管鳞癌细胞中E-cadherin和Vimentin表达的变化;在ECA109细胞中上调mi RNA-let-7a或者干扰Lin28通过定量PCR检测中Slug、Snail的m RNA水平及Western blotting法检测Lin28、MMP-2、MMP-9、VEGF-C、VEGF-A蛋白表达变化;ELISA法检测上调micro RNA-let-7a前后ECA109细胞上清液中VEGF-C、MMP-2和MMP-9的表达改变;(4)通过Western blotting法对比检测Het-1a细胞与食管鳞癌TE-1、ECA109细胞间Wnt信号通路活化程度,以及上调或抑制micro RNA-let-7a对ECA109细胞Wnt信号的影响;结合Wnt信号激活剂Li Cl和抑制剂ICG-001,在食管鳞癌细胞中验证Lin28蛋白表达变化对micro RNA-let-7a调控作用;进一步利用定量PCR检测及Western blotting法检测Wnt/Lin28负向调控Micro RNA-let-7a表达后浸润、侵袭能力改变。【结果】(1)食管鳞癌患者癌组织中micro RNA-let-7a,micro RNA-let-7b和micro RNA-let-7c表达均低于癌旁组织,其中micro RNA-let-7a表达差异相对明显;食管鳞癌组织中低表达的micro RNA-let-7a与TNM分期及肿瘤复发密切相关而与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤部位无相关性;(2)食管鳞癌细胞系中micro RNA-let-7a表达量显著低于正常的食管上皮细胞;在食管鳞癌ECA109细胞中上调或者抑制micro RNA-let-7a不同时间对增殖能力均无影响;而抑制micro RNA-let-7a表达可以促进食管鳞癌细胞的迁移、侵袭发生;(3)ECA109和TE-1细胞中过表达或抑制micro RNA-let-7a后形态上无明显变化;免疫荧光及免疫印迹结果显示,上调ECA109细胞中的micro RNA-let-7a增加了E-cadherin表达强度,而Vimentin表达下降;干扰Lin28的表达或者上调micro RNA-let-7a均能下调EMT相关转录因子Slug、Snail的表达水平,同时micro RNA-let-7a表达改变对Lin28蛋白无显著影响;干扰Lin28的表达或者上调micro RNA-let-7a可明显降低ECA109细胞中MMP9和VEGF-C的表达;在ECA109细胞中上调micro RNA-let-7a可以下调VEGF-C和MMP9的分泌量;(4)在食管鳞癌中,micro RNA-let-7a表达改变对Wnt通路活化无显著影响;激活或抑制Wnt通路可通过上调或减少Lin28蛋白表达来控制micro RNA-let-7a表达下调或上调,以及随之带来的EMT发生、浸润和侵袭。【结论】食管鳞癌中Wnt通路异常活化可通过Lin28来抑制micro RNA-let-7a表达,进而促进转移发生。