背景与目的:原发性肝癌(以下简称肝癌)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,也是亚洲和非洲地区恶性肿瘤中导致死亡的主要原因,尤其是在中国。据估计全球约有一半的原发性肝癌病例发生在中国。目前肝癌的治疗方法主要是手术切除和放化疗。虽然手术和放化疗对肝癌的治疗取得了一定的疗效,但是肝癌的五年生存率低,死亡率仍然很高。因此,寻找一种新的治疗肝癌的方法迫在眉睫。大量研究表明声动力学疗法在恶性肿瘤治疗中具有较高的应用前景。本研究旨在探讨MPPa声动力作用对小鼠肝癌细胞H22的杀伤作用及机制。材料与方法:先用流式细胞仪检测加药孵育后的H22细胞内MPPa的平均荧光强度值以掌握H22细胞对MPPa的吸收规律;再通过MTT法细胞毒性检测MPPa声动力作用后对小鼠肝癌H22细胞生长的影响;并在倒置显微镜下观察H22细胞的形态变化;采用测温探针监测超声处理过程中细胞悬液的温度变化情况;采用Hoechst33258细胞核荧光染色法观察MPPa声动力作用后小鼠肝癌细胞H22细胞核的变化情况;再用Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪用以检测MPPa声动力作用对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响;采用透射电子显微镜观察MPPa声动力作用后H22细胞内超微结构的变化;采用Rhodamine123染色结合流式细胞仪检测来了解H22细胞内线粒体膜电位的变化;最后采用DCHF-DA染色了解H22细胞内产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的情况。结果:从流式细胞术检测的结果可以看到加入MPPa后小鼠肝癌细胞H22细胞内的荧光强度值随着孵育时间的增加而增高,在20小时达最大值,此后趋于平台;用MTT细胞毒性检测法发现MPPa声动力作用组对小鼠肝癌H22细胞的杀伤率明显高于其他对照组,且杀伤作用呈时间依赖关系;在倒置光学显微镜下观察发现与其他对照组相比,MPPa声动力实验组的细胞数量明显减少,细胞出现固缩,可见许多细胞碎片;温度监测结果显示细胞悬液的温度随着超声处理时间的增加而有所升高,但是在本实验所选用的时间范围内温度增高不明显,在20秒的温度不超过37度;Hoechst33258细胞核染色结果显示MPPa声动力组在超声处理后6小时出现了明显的细胞凋亡现象;用Annexin V-FITC/PI试剂盒染色流式细胞仪检测发现MPPa声动力作用组在超声处理后6小时,细胞凋亡率较其他对照组明显增加;通过透射电镜观察发现MPPa声动力组在超声处理后6小时,出现线粒体肿胀和细胞坏死,凋亡小体;用Rhodamine123染色经流式细胞仪对H22细胞线粒体膜电位检测显示MPPa声动力组在超声作用后6小时,H22细胞内线粒体膜电位显著降低;用DCFH-DA标记经流式细胞仪对H22细胞内ROS检测显示MPPa声动力组在超声作用后3小时,H22细胞内ROS含量明显增加。结论:MPPa声动力作用能够有效的杀伤肝癌细胞,此杀伤作用可能是通过使细胞内ROS生成增加而致线粒体功能受损从而诱导细胞的凋亡实现的。MPPa声动力疗法可能是一种潜在的治疗肝癌的新方法。因此MPPa可以作为一种新型声敏剂,从而具有更加广泛的推广和应用价值。