人参锈腐病颉颃放线菌的筛选及鉴定

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:yxdtlwj
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本研究于2006年至2007年,从吉林省的通化市、靖宇县和长白县三地采集人参根际土样126份,从中分离出真菌39株、细菌68株、放线菌232株,对人参根际的放线菌、真菌、细菌数量的变化进行了研究。研究结果表明,随着栽参年限的增加,人参根际土壤中微生物数量呈下降的趋势,其中新林土中的微生物数量最多,老参地中最少;新林土到1年与5年到老参地这两个时间段根际土壤中微生物数量降低幅度较大。随着深度的增加,土壤微生物数量呈下降的趋势,其中0~5cm与5~10cm土层间的降低幅度要高于5~10cm与10~15cm土层间;不同年限同一土层的土壤中,微生物数量不完全遵循下降的趋势。对分离出的39株真菌、68株细菌、232株放线菌与人参锈腐病菌进行了颉颃试验,结果表明,39株真菌对人参锈腐病菌完全没有颉颃作用;68株细菌中仅有3株有颉颃作用,但是作用不大且效果很不稳定;232株放线菌中筛选出颉颃效果较好的有9株,据此对这9株放线菌进行再次筛选。对这9株放线菌进行液体培养,取其发酵液对锈腐病菌进行颉颃试验,计算抑菌率,从中选出颉颃效果最好的菌株MS32,颉颃带宽度为11mm,抑菌率为76.45%。对菌株MS32的液体培养条件进行了初步研究,主要研究培养基、温度、pH和培养时间对其发酵液抑菌效果的影响;并在此基础上对培养条件进行4因素3水平正交试验,最终确定了MS32的最适液体培养条件:培养基为玉米粉大豆粉培养基、温度为29℃,pH8,培养时间为120h。对该株放线菌进行了形态学观察和部分生理生化反应的测定,并对16S rDNA序列进行了测定。形态学观察得出此株放线菌具有典型的链霉菌属的特征,证实其为链霉菌属。生理生化反应测定结果为:菌株MS32使明胶液化,不产生H2S,牛奶不凝固胨化,淀粉水解,纤维素水解;可以利用D-葡萄糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、肌醇作为碳源。对MS32的16S rDNA序列测定,其核苷酸序列长度为1250bp,将所测序列与从GenBank数据库中的同源性较高的32个链霉菌属放线菌序列进行比较,在系统进化树上菌株MS32与1个已知种Streptomyces naraensis(AB184691)部分16S rDNA序列98%相似,与另外2个菌株的的同源性也为98%,说明这4个菌株可能属于同一个种。
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