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目的：采用Lable-free(非标记定量蛋白组学)技术，从唾液蛋白组的动态变化中证实肾-唾相关的科学内涵；探索肾虚体质、肾虚证候的的特异性差异蛋白及其形成过程中的生物标志物，探索六味地黄丸的药物分子靶标，为多种慢性病、老年病的防治提供客观依据。
方法：①基于“恐伤肾”理论，采用“猫吓鼠”的实验动物造模方法，复制“先天不足+后天失养”的肾虚质动物模型。将16只孕鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ组，Ⅰ组6只孕鼠孕期不恐吓，正常喂养，待其产子后随机抽取12只仔鼠，作为正常体质组，雌雄比例1:1。Ⅱ组的10只孕鼠，妊娠次日起予以恐吓，产子后随机抽取48只仔鼠，作为肾虚体质组、肾虚证候组、肾虚体质干预组、肾虚证候干预组，每组12只，雌雄比例均为1:1。将各组仔鼠正常喂养四周后，肾虚证候组、肾虚证候干预组采用氢化可的松肌注造模十天。从第十一天，运用六味地黄丸对肾虚体质干预组、肾虚证候干预组治疗一个月。②造模成功后，收集各组大鼠唾液，运用Lable-free技术进行质谱信号的检测，差异蛋白的筛选，采用层次聚类分析，GO注释富集分析，KEGGpathway分析以及网络相关性分析法对差异蛋白进行定性定量分析。
结果：①大鼠一般状况观察：正常体质组大鼠饮食如常、毛色润泽、行为敏捷、二便正常、体重增长快；肾虚体质组大鼠出现躁动易惊、毛发稀疏、体重减轻、活动量减少、尿量减少等现象；肾虚证候组大鼠、毛发枯糙色黄、反应迟钝、大便干、饮水量增加、尿量减少、尾巴色红、弯腰弓背、易扎堆。肾虚体质组大鼠用药后体质量有所增长、毛色改善、毛发量增加、活动量尚可。肾虚证候组大鼠用药后毛色有光泽、饮水量尚可、大便成形但不干燥，弯腰弓背的状况有所改善。②Lable-free唾液蛋白组学质谱检测：各对比组共检测到肽段2655个，蛋白1302个。以uniquepeptide>0，Foldchange＞1.2或＜0.83，且P-value＜0.1，蛋白有确定的基因名称为差异蛋白的筛选标准。与正常体质组(简称ZC)对比，肾虚体质组(简称ST)大鼠有差异蛋白14个，其中上调蛋白5个，下调蛋白9个；与肾虚体质组对比，肾虚体质干预组(简称STG)有差异蛋白18个，其中上调蛋白16个，下调蛋白2个；Gm2a，Lghv7-4，Nucb2为这两个对比组共有的蛋白。Gm2a，Lghv7-4在ST-VS-ZC组中下调，在STG-VS-ST组中上调。而Nucb2在ST-VS-ZC组中上调，在STG-VS-ST组中下调，差异具有统计学意义(p＜0.05)。与正常体质组比较，肾虚证候组(简称SZ)有差异蛋白8个，其中上调蛋白3个，下调蛋白5个；与肾虚证候组比较，肾虚证候干预组(简称SZG)有差异蛋白6个，其中上调蛋白5个，下调蛋白1个。Cst5为这两个对比组共有的差异蛋白，在SZ-VS-ZC组中下调，在SZG-VS-SZ组中上调。Prr4，Grpcb，Bpifa2为ST-VS-ZC组和SZ-VS-ZC组中共有的蛋白，前两者均为下调蛋白，Bpifa2为上调蛋白。Tcn2为STG-VS-ST组和SZG-VS-SZ组共有的蛋白，均为上调蛋白。
结论：①本次实验复制的“先天不足+后天失养”的肾虚体质动物模型，氢化可的松肌注的肾虚证候动物模型，符合各自的动物模型特征。②对差异蛋白进行筛选和定性定量分析，发现Gm2a，Lghv7-4，Nucb2可能为肾虚体质的特异性蛋白，为六味地黄丸的干预靶点。Cst5可能为肾虚证候的特异性蛋白及六味地黄丸的干预靶点。③Prr4，Grpcb，Bpifa2可能为肾虚体质和肾虚证候共有的特异性差异蛋白。Tcn2可能为六味地黄丸干预肾虚的靶点。④溶酶体、氮代谢、细胞凋亡可能为肾虚质的特异性途径，溶酶体、细胞凋亡可能为六味地黄丸的干预途径。唾液分泌、肾素血管紧张素系统可能为肾虚证候的特异性途径，唾液分泌可能为六味地黄丸的生物标志物。
方法：①基于“恐伤肾”理论，采用“猫吓鼠”的实验动物造模方法，复制“先天不足+后天失养”的肾虚质动物模型。将16只孕鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ组，Ⅰ组6只孕鼠孕期不恐吓，正常喂养，待其产子后随机抽取12只仔鼠，作为正常体质组，雌雄比例1:1。Ⅱ组的10只孕鼠，妊娠次日起予以恐吓，产子后随机抽取48只仔鼠，作为肾虚体质组、肾虚证候组、肾虚体质干预组、肾虚证候干预组，每组12只，雌雄比例均为1:1。将各组仔鼠正常喂养四周后，肾虚证候组、肾虚证候干预组采用氢化可的松肌注造模十天。从第十一天，运用六味地黄丸对肾虚体质干预组、肾虚证候干预组治疗一个月。②造模成功后，收集各组大鼠唾液，运用Lable-free技术进行质谱信号的检测，差异蛋白的筛选，采用层次聚类分析，GO注释富集分析，KEGGpathway分析以及网络相关性分析法对差异蛋白进行定性定量分析。
结果：①大鼠一般状况观察：正常体质组大鼠饮食如常、毛色润泽、行为敏捷、二便正常、体重增长快；肾虚体质组大鼠出现躁动易惊、毛发稀疏、体重减轻、活动量减少、尿量减少等现象；肾虚证候组大鼠、毛发枯糙色黄、反应迟钝、大便干、饮水量增加、尿量减少、尾巴色红、弯腰弓背、易扎堆。肾虚体质组大鼠用药后体质量有所增长、毛色改善、毛发量增加、活动量尚可。肾虚证候组大鼠用药后毛色有光泽、饮水量尚可、大便成形但不干燥，弯腰弓背的状况有所改善。②Lable-free唾液蛋白组学质谱检测：各对比组共检测到肽段2655个，蛋白1302个。以uniquepeptide>0，Foldchange＞1.2或＜0.83，且P-value＜0.1，蛋白有确定的基因名称为差异蛋白的筛选标准。与正常体质组(简称ZC)对比，肾虚体质组(简称ST)大鼠有差异蛋白14个，其中上调蛋白5个，下调蛋白9个；与肾虚体质组对比，肾虚体质干预组(简称STG)有差异蛋白18个，其中上调蛋白16个，下调蛋白2个；Gm2a，Lghv7-4，Nucb2为这两个对比组共有的蛋白。Gm2a，Lghv7-4在ST-VS-ZC组中下调，在STG-VS-ST组中上调。而Nucb2在ST-VS-ZC组中上调，在STG-VS-ST组中下调，差异具有统计学意义(p＜0.05)。与正常体质组比较，肾虚证候组(简称SZ)有差异蛋白8个，其中上调蛋白3个，下调蛋白5个；与肾虚证候组比较，肾虚证候干预组(简称SZG)有差异蛋白6个，其中上调蛋白5个，下调蛋白1个。Cst5为这两个对比组共有的差异蛋白，在SZ-VS-ZC组中下调，在SZG-VS-SZ组中上调。Prr4，Grpcb，Bpifa2为ST-VS-ZC组和SZ-VS-ZC组中共有的蛋白，前两者均为下调蛋白，Bpifa2为上调蛋白。Tcn2为STG-VS-ST组和SZG-VS-SZ组共有的蛋白，均为上调蛋白。
结论：①本次实验复制的“先天不足+后天失养”的肾虚体质动物模型，氢化可的松肌注的肾虚证候动物模型，符合各自的动物模型特征。②对差异蛋白进行筛选和定性定量分析，发现Gm2a，Lghv7-4，Nucb2可能为肾虚体质的特异性蛋白，为六味地黄丸的干预靶点。Cst5可能为肾虚证候的特异性蛋白及六味地黄丸的干预靶点。③Prr4，Grpcb，Bpifa2可能为肾虚体质和肾虚证候共有的特异性差异蛋白。Tcn2可能为六味地黄丸干预肾虚的靶点。④溶酶体、氮代谢、细胞凋亡可能为肾虚质的特异性途径，溶酶体、细胞凋亡可能为六味地黄丸的干预途径。唾液分泌、肾素血管紧张素系统可能为肾虚证候的特异性途径，唾液分泌可能为六味地黄丸的生物标志物。