本课题主要从诱导细胞凋亡的视角，提出了具有佐剂效应的RNA分子与抗原蛋白共表达的全新思路，对DNA疫苗载体的优化策略进行了探索。以SFV为代表的甲病毒复制子载体是目前DNA疫苗研究的一个热点。这类载体借助高水平的转录和免疫激活功能获得了比传统的DNA疫苗载体更高的抗原呈递和免疫激活效率[1]。但是基于SFV复制子的DNA疫苗的免疫效果受到基因表达设计等因素的影响，仍存在很大的优化空间。体外研究表明，SFVC蛋白mRNA编码区5’-端102bp是一个翻译增强区，对其下游编码序列的翻译有一定的增强作用[2,3]。但是在基于甲病毒复制子的DNA疫苗中引入该翻译增强区对于疫苗的免疫原性的影响尚未见报道。因此，我们对表达HIVGag抗原的SFV复制子DNA疫苗进行了改造，在gag基因5’端融合了SFVC蛋白的翻译增强区，并对该序列对抗原表达和疫苗免疫原性的影响进行探讨。试验结果表明，衣壳蛋白5’翻译增强区增强了Gag表达和特异性细胞免疫应答水平，但对体液免疫应答没有显著影响。 　　我们尝试选择一个简单有效的凋亡刺激信号作为小分子佐剂应用于DNA疫苗。国外研究者曾对能够在体外激活PKR(dsRNA依赖性蛋白激酶)的RNA分子结构作了大量的基础性研究工作，而PKR是与病毒感染诱导的细胞凋亡和IFN抗病毒效应密切相关的一个重要的媒介分子[5]。因此，我们在现有的疫苗载体pDRVI1.0上引入能够转录产生特殊结构的87nt单链RNA的表达盒，并分析该表达盒对细胞凋亡和DNA疫苗免疫效率的影响。试验结果表明，本研究所构建的单链RNA表达盒明显促进了体外转染细胞的凋亡，并在10μg、100μg两个免疫剂量均显著增强了HIV-1gag特异性体液和细胞免疫应答水平。