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本研究采用3个试验对紫花苜蓿寡肽的制备工艺及其利用性进行了系统的研究。主要结果如下:
1.采用酸化加热加盐的综合方法从苜蓿干草中提取叶蛋白,以叶蛋白粗蛋白质提取率为指标,分别进行了预浸时间、絮凝温度、料水比、加盐量、PH和絮凝时间6个因素对叶蛋白粗蛋白质提取率影响的单因素试验。并在单因素试验基础上,以叶蛋白粗蛋白质提取率、叶蛋白粗蛋白质含量和叶蛋白得率为考察指标,通过料水比、加盐量、絮凝时间和PH四因素三水平的正交试验,得出影响苜蓿干草中叶蛋白提取的因素依次为料水比)加盐量)PH)絮凝时间,最佳工艺条件为加盐量1%,预浸时间24h,打浆5min,料水比1∶20,pH 2.5,60℃条件下絮凝5min。在此条件下,粗蛋白质提取率和叶蛋白中粗蛋白质含量分别为30.50%和57.01%。
2.以苜蓿叶蛋白为原料,采用酶解法制备寡肽。以水解度为指标,通过单酶筛选和双酶组合试验,确定了复合胰蛋白酶和北京美的公司碱性蛋白酶为最佳双酶组合,分别进行了底物浓度、酶解温度、酶活比、酶活添加量和pH的单因素试验和五因素四水平正交试验。结果表明,双酶组合水解叶蛋白的最佳工艺条件为90℃预热处理15min,pH 8.6,酶解温度50℃,酶活添加量5000U/g(净蛋白),酶活比2∶3(复合胰蛋白酶:北京美的公司碱性蛋白酶),底物浓度3%。在此条件下,水解度为60.73%,酸溶性肽得率为80.25%。
3.苜蓿草粉、苜蓿叶蛋白和苜蓿寡肽三种饲料氨基酸消化率的比较。将16只健康的400日龄海兰褐父母代种公鸡设置4个重复,每个重复4只鸡,将苜蓿草粉、苜蓿叶蛋白和苜蓿寡肽轮流强饲试鸡,进行氨基酸消化率的测定。结果表明:苜蓿寡肽与苜蓿草粉相比较,在丝氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸消化率上的差异达到极显著水平(P<0.01),在胱氨酸、酪氨酸消化率上的差异达到显著水平(P<0.05),其余氨基酸的消化率在这两者之间的差异均未达到显著水平(P>0.05)。苜蓿叶蛋白与苜蓿草粉相比,在脯氨酸、赖氨酸、蛋氨酸消化率上的差异达到极显著水平(P<0.01),在酪氨酸消化率上的差异达到显著水平(P<0.05),其余氨基酸的消化率在这两者之间的差异均未达到显著水平(P>0.05)。苜蓿寡肽与苜蓿叶蛋白相比较,在甘氨酸消化率上的差异达到极显著水平(P<0.01),在胱氨酸消化率上的差异达到显著水平(P<0.05),其余氨基酸的消化率在这两者之间的差异均不显著(P>0.05)。但从表观数值上来看,苜蓿寡肽的氨基酸真消化率高于苜蓿叶蛋白。3种饲料的氨基酸吸收效率由大到小依次为:苜蓿寡肽、苜蓿叶蛋白、苜蓿草粉。