【摘 要】
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本文以分离于贵州省花溪地区仔猪腹泻样品中的大肠杆菌为材料,设计一对特异性扩增引物,经PCR筛选得到三株FedA阳性菌株,并将约为510bp的扩增片段分别与载体pUCm-T连接,转化大
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本文以分离于贵州省花溪地区仔猪腹泻样品中的大肠杆菌为材料,设计一对特异性扩增引物,经PCR筛选得到三株FedA阳性菌株,并将约为510bp的扩增片段分别与载体pUCm-T连接,转化大肠杆菌,经菌落PCR筛选、限制性内切酶酶切分析后获得阳性克隆pUFA1,pUFA4,pUFA6;双脱氧末端终止法测定重组质粒插入片段的核苷酸序列,鉴定出1株FedA3和2种长度各不相同的新型FedA基因,分别命名为FedA9,FedA10,并研究了其推导氨基酸序列和菌毛抗原类型.同时,本文将变异性较大的Pd1 FedA(FedA9)基因克隆到表达性载体pQE30中,经酶切鉴定得到阳性重组质粒pQE30-FedA9,重组菌经IPTG诱导8小时后表达出19.27KD的融合蛋白.本文研究表明,在贵州花溪地区流行的致泻性大肠杆菌的菌毛类型为FedA3和FedA9两种类型,其中FedA9不同于已知类型,为首次报道.同时在FedA9基因原核系统中表达后得到分子量为19.27KD的融合蛋白,为制备菌毛基因工程疫苗奠定了基础.
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