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第一部分VEGF和PEDF与血-视网膜内屏障损伤的相关性研究目的观察早期糖尿病大鼠视网膜中VEGF和PEDF的表达变化与血—视网膜内屏障损伤的关系。方法12只健康Wistar大鼠作正常组,48只大鼠建立糖尿病模型后,随机平均分为模型组、PBS干预组、Avastin干预组和PEDF干预组,喂养4周取右眼玻璃体腔内注射:正常组、糖尿病模型组行假注射,PBS组注入2μL0.01MPBS,Avastin干预组注入2μLAvastin,PEDF干预组注入2μL重组人PEDF蛋白,48小时后采用伊文思兰(EB)示踪法定量视网膜血管通透性改变,免疫组化和免疫荧光法观察视网膜VEGF、PEDF的表达变化。结果(1)糖尿病模型组EB渗漏量是正常组的2.68倍;PBS组干预眼与自身对照眼和糖尿病模型组无显著性差异,是正常组的2.78倍;Avastin与PEDF组对照眼与糖尿病模型组无显著性差异,分别是自身干预眼的2.63和2.52倍。(2)糖尿病模型组和PBS干预组视网膜VEGF蛋白表达较正常组增加,PEDF表达减少;Avastin干预后VEGF表达较自身对照眼及糖尿病模型组减少,PEDF无显著性差异;PEDF干预后VEGF表达较自身对照眼及糖尿病模型组减少,PEDF表达增加。结论(1)糖尿病早期即出现血-视网膜内屏障损伤,主要表现为视网膜血管渗漏增强。(2)血-视网膜内屏障损伤的同时伴有视网膜VEGF表达增加和PEDF的减少,抑制VEGF或增加PEDF表达,平衡VEGF/PEDF,可减轻血-视网膜内屏障损伤。(3) PEDF减轻血-视网膜内屏障损伤可能是通过负性调节VEGF表达实现。第二部分复方血栓通胶囊对糖尿病性黄斑水肿的防治作用和机制探讨目的通过观察复方血栓通胶囊对血-视网膜内屏障的影响,探讨其对糖尿病性黄斑水肿的治疗效果及作用机制。方法(1)正常雄性Wistar大鼠作为正常对照组(N组,n=12),STZ诱导大鼠糖尿病模型,将成模大鼠随机分为糖尿病模型组(DM组,n=12),复方血栓通胶囊中剂量组(FXST-M组,n=12)和复方血栓通胶囊高剂量组(FXST-H组,n=12)。(2) N组和DM组予生理盐水1ml经食道灌胃,FSXT-M和FXST-H组分别按900mg/kg和1800mg/kg剂量,同法给予复方血栓通胶囊进行治疗,每日一次,持续4周。(3) EB示踪法定量检测视网膜血管通透性改变。(4)免疫组织化学法观察视网膜VEGF蛋白表达变化,免疫荧光化学法观察视网膜PEDF蛋白表达变化。(5) RT-PCR半定量分析视网膜VEGFmRNA、PEDFmRNA变化。结果(1) DM组的EB渗漏量(36.71ng/mg)分别是N组(13.68ng/mg),FXST-H组(14.13 ng/mg)和FXST-M组(13.45 ng/mg)的2.68、2.60、2.73倍(P＜0.05),FXST-H和FXST-M组与N组比较无显著性差异,且两组间差异无统计学意义。(2)与N组比较,DM组VEGF蛋白表达和mRNA含量增加,PEDF蛋白表达和mRNA含量减少(P＜0.05),(3)FXST-M和FXST-H组VEGF的蛋白表达和mRNA含量较DM组减少(P＜0.05),与N组比较无显著性差异,PEDF蛋白表达和mRNA含量较N组减少(P＜0.05),与DM组无显著性差异。结论(1)复方血栓通胶囊能减轻视网膜血管渗漏,稳定血-视网膜内屏障,对糖尿病性黄斑水肿具有防治作用。(2)抑制VEGF过表达,平衡VEGF/PEDF比值,可能是复方血栓通胶囊防治DME的机制之一。