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为研究U266细胞对硼替佐米(Bortezomib, Bor)应用前后对γδT细胞杀伤敏感性的变化,并初步探讨其机制。本研究采用MTT法检测Bor作用后对U266细胞和γδT细胞增殖的抑制作用；钙黄绿素法检测比较Bor作用前后γδT细胞对U266细胞的杀伤的变化；Annexin V-FITC法检测Bor作用后对U266细胞细胞凋亡的影响；通过流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测比较Bor作用前后对U266细胞表面自然杀伤细胞,2群成员D(natural-killer group2member D, NKG2D)配体(包括ULBP1、ULBP2、 ULBP3、MICA/B)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)(包括DR4、DR5)表达的影响。研究结果表明：我们利用MM患者外周血成功培养扩增出中位浓度为90%(76%～98%)的γδT细胞,其在体外对多发性骨髓瘤U266细胞杀伤作用明显,并且随着效靶比的增高,杀伤率随之增加；细胞生长增殖抑制实验结果显示,Bor对U266细胞及γδT细胞均可产生抑制作用,并且随着药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制率随之增加；细胞凋亡的实验结果显示,Bor能诱导U266细胞凋亡,且随着药物作用时间的延长,凋亡率随之增加；选取10.0nmol/L的Bor预孵育U266细胞8h后,γδT细胞对U266细胞的杀伤作用较未处理组显著升高。选取浓度为10.0nmol/L的Bor分别孵育U266细胞8h、16h、24h后,与未处理组相比,8h处理后,U266细胞表面NKG2D配体(ULBP1、ULBP2、ULBP3. MICA/B)和TRAIL (DR4、DR5)表达量均增高；16h处理后,U266细胞表面ULBP2、MICA/B和DR4表达量明显增高,而U266细胞表面ULBP1、ULBP3、DR5表达量未见明显变化。24h处理后,U266细胞表面NKG2D配体(ULBP1、 ULBP2、ULBP3、MICA/B)和TRAIL (DR4、DR5)表达率均出现降低。根据上述实验结果得出以下结论：(1)成功培养扩增出纯度较高的γδT细胞,γδT细胞对U266细胞具有明显杀伤作用并呈剂量依赖性；(2)Bor对U266细胞及γδT细胞生长具有抑制作用,Bor对U266细胞的生长抑制呈时间和浓度依赖性；Bor诱导U266细胞凋亡,这种诱导凋亡作用存在时间依赖性；(3)Bor预处理后,γδT细胞对U266细胞的杀伤作用高于未处理组及单药组,两者联合具有协同作用；其机制可能与细胞表面NKG2D配体(ULBP1、ULBP2、ULBP3. MICA/B)和TRAIL (DR4. DR5)表达率的上调有关。(4)U266细胞经Bor孵育后,U266细胞表面NKG2D配体(ULBP1、 ULBP2、ULBP3、MICA/B)和TRAIL (DR4、DR5)表达量呈现出先升高后降低的趋势,这对于两者联合时间点的选择有着重要意义。