王不留行抗炎、镇痛活性部位筛选及其作用机制研究

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王不留行为石竹科植物麦蓝菜[Vaccaria segetalis(Neck.) Garcke]的干燥成熟种子,味苦、平,归肝、胃经,功效为活血通经、下乳消肿、利尿通淋。临床用于经闭、痛经、乳汁不下、乳痈肿痛和淋症涩痛等。王不留行种子含多种环苷、环肽和黄酮苷类成分,如洋芹素-6-C-阿拉伯糖-葡萄糖苷、王不留行环肽A和王不留行黄酮苷等。现代药理研究表明王不留行不仅具有促进泌乳、抑制新生血管生成和抗氧化等作用,王不留行水煎液也具有较好的抗炎、镇痛效果。但是王不留行抗炎、镇痛的有效部位及其作用机制尚不清楚。本实验利用植物化学的方法将王不留行提取物分离为不同的极性部位,然后利用整体药理实验筛选王不留行抗炎、镇痛的活性部位,结合生物化学和分子生物学方法研究活性部位抗炎作用的可能机理。实验内容包括以下几个方面:1.采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法测定王不留行与炒王不留行的乙醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等不同极性溶剂提取物的抗炎作用。300mg/kg剂量下,除乙醚提取部位外,生、炒王不留行水提取部位、正丁醇提取部位和乙酸乙酯提取部位都能极显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓的炎性肿胀度;炒王不留行抗急性炎症的活性大于王不留行;两种王不留行乙酸乙酯提取物抗急性炎症的活性均最强。因此,王不留行与炒王不留行所含抗炎成分存在一定的差异。2.采用棉球肉芽肿法测定炒王不留行水提取部位、正丁醇提取部位和乙酸乙酯提取部位对慢性炎症的抑制作用。结果表明炒王不留行三种提取部位低、中、高剂量组对小鼠棉球肉芽肿都有显著的抑制作用,并且具有剂量依赖性;炒王不留行三种提取部位都有抗慢性炎症的作用,而且乙酸乙酯提取部位的抗炎效果优于其它两个提取部位。3.采用醋酸扭体法测定炒王不留行水提取部位、正丁醇提取部位和乙酸乙酯提取部位的镇痛作用。结果表明炒王不留行三种提取部位都能剂量依赖性地显著降低醋酸致小鼠扭体次数的增加,而且相同剂量下正丁醇提取部位的镇痛作用优于其它两个萃取部位的。4.进一步采用热板法测定炒王不留行水提取部位、正丁醇提取部位和乙酸乙酯提取部位的镇痛作用。结果表明炒王不留行三种提取部位都能剂量依赖性地显著降低热致小鼠舔足次数的增加,而且相同剂量下正丁醇提取部位的镇痛作用优于其它两个萃取部位的。该结果与醋酸扭体法的实验结果一致。5.为了阐明炒王不留行各提取部位抗炎活性的机理,考察了它们对慢性炎症小鼠血清中MDA和TNF-α的影响,以及肝脏组织中NO、TNOS和iNOS的影响。结果表明炒王不留行三种提取部位都能剂量依赖性地显著降低慢性炎症小鼠血清中MDA和TNF-α的产生;肝脏组织中NO、TNOS和iNOS的含量。因此,炒王不留行三种提取部位的抗炎机理至少部分可以用抑制MDA、TNF-α和NO的产生来解释。6.采用超声提取法对从炒王不留行中提取总黄酮的工艺条件进行了优化研究。结果表明,炒王不留行总黄酮提取较佳工艺为:用10倍量50%乙醇60℃提取3次,每次30min。
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