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目的:肾细胞癌是泌尿系常见的恶性肿瘤,占成人恶性肿瘤的2%-3%,近年来其发病率逐年升高,严重威胁人类健康,在发达国家,其发病率上升更快,大部分肾癌是散发性的,家族遗传性肾癌发病较少。肾细胞癌发病机制复杂,流行病学资料表明所有形式的烟草暴露都是其公认的危险因素,并且随烟草累积剂量和年限延长其危险度增高,同时肥胖,高蛋白、高脂肪、低蔬菜饮食也是其危险因素。随着分子生物学的研究发展,除这些危险因素外,肾癌的发生还与基因突变、失活、表观遗传学改变等有关,尤其是DNA甲基化改变,已成为肿瘤研究中的重要方法。RASSF家族(RASSF1-RASSF10)是Ras信号通路负向调节基因家族,其大多数成员都因基因启动子甲基化改变导致表达缺失而在多种肿瘤进展中发生作用。RASSF10基因启动子高甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病、甲状腺癌、黑色素瘤、前列腺癌等研究中已有文献报道,是一个潜在的抑癌基因,但RASSF10基因在肾细胞癌中尚未见类似研究报道,其表达水平及甲基化状态又如何?本课题旨在通过分析RASSF10基因在人肾细胞癌、癌旁及正常组织之间表达情况及甲基化结果,明确其在肾癌组织、癌旁及正常组织中有无表达差异,甲基化结果有无差异,m RNA与基因启动子区甲基化关系,并统计分析RASSF10基因表达水平、甲基化结果和肾细胞癌患者临床资料之间关系,探讨RASSF10基因在肾细胞癌发生、发展中的作用,为肾细胞癌诊断、治疗提供新的靶点和思路。方法:1利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测52例肾细胞癌组织、癌旁及正常组织中RASSF10基因m RNA相对表达量,统计分析其m RNA相对表达量与临床资料之间关系。2利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测52例肾细胞癌组织、癌旁及正常组织中RASSF10基因的甲基化状态,结合相关临床资料,用统计学分析处理实验数据,探讨RASSF10基因在肾细胞癌发生、发展中的作用。结果:1在对52例肾细胞癌组织、癌旁及正常组织应用甲基化特异性聚合酶链反应检测中,发现存在三种不同的甲基化状态,即完全甲基化,不完全甲基化,完全非甲基化。2利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测52例肾细胞癌组织、癌旁及正常组织中RASSF10基因的m RNA表达水平时,发现其相对表达量分别为0.62±0.04、0.74±0.03、0.75±0.05,经统计学处理分析,发现癌组织中RASSF10基因的m RNA表达水平低于癌旁及正常组织中该基因的m RNA表达量,均有统计学差异(P<0.01);正常肾组织RASSF10基因的m RNA相对表达量均值虽高于癌旁组织中该基因相对表达量,但二者之间的差异无统计学意义(P>0.05)。3在52例肾癌组织中,RASSF10基因的m RNA相对表达量与患者性别(t=1.29,P=0.202)、年龄(t=-1.94,P=0.060)、病理类型(t=-1.54,P=0.131)、肿瘤体积(t=1.99,P=0.052)这些临床资料之间并无显著差异(P均>0.05)。4在52例肾细胞癌组织中,RASSF10基因甲基化率为69.2%(36/52例),癌旁组织中RASSF10基因甲基化率为36.5%(19/52例),正常肾组织中RASSF10基因甲基化率为25.0%(13/52例),肾细胞癌组织中甲基化率高于癌旁组织的甲基化率(?2=11.15,P=0.001),癌组织甲基化率也明显高于正常组织中甲基化率(?2=20.41,P=0.000),差异具有统计学意义(P<0.05)。男性组RASSF10基因甲基化发生率69.7%(23/33),女性组RASSF10基因甲基化发生率68.4%(13/19),差异无统计学意义(P>0.05)。年龄大于等于60岁组中RASSF10基因甲基化发生率为73.9%(17/23),年龄不足60岁组RASSF10基因甲基化发生率65.5%(19/29),差异无统计学意义(P>0.05)。透明细胞癌组RASSF10基因甲基化发生率68.3%(28/41),非透明细胞癌组RASSF10基因甲基化发生率72.7%(8/11),差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤体积≥7cm组中RASSF10基因甲基化发生率68.6%(24/35),肿瘤体积<7cm组中RASSF10基因甲基化发生率70.6%(12/17),差异无统计学意义(P>0.05)。Fuhrman分级方面,高分化组RASSF10基因甲基化率为62.5%(5/8),中分化组RASSF10基因甲基化率为66.7%(16/24),低分化或未分化组RASSF10基因甲基化率为75.0%(15/20),三组比较无统计学差异(P>0.05)。5 RASSF10基因启动子区甲基化与患者性别(?2=0.01,P=0.923)、年龄(?2=0.42,P=0.514)、病理类型(?2=0.08,P=0.78)、肿瘤体积(?2=0.02,P=0.882)、Fuhrman分级(?2=0.56,P=0.757)无相关性(P均>0.05),与肿瘤的TNM分期有一定的相关性(P<0.05),肿瘤TNM分期Ⅲ-Ⅳ的患者比Ⅰ-Ⅱ期的甲基化率高(P=0.043)。6在癌组织中,甲基化状态阴性的病例其m RNA表达水平高于甲基化状态阳性病例m RNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1 RCC组织中RASSF10基因m RNA表达水平减低或缺失,明显低于癌旁及正常组织中该基因m RNA相对表达量。2 RCC组织中RASSF10基因启动子甲基化阳性率明显高于癌旁及正常组织,并且与肿瘤TNM分期正相关。3 RCC组织中RASSF10基因m RNA的表达降低或缺失与其启动子高甲基化状态负相关,RASSF10基因启动子甲基化可能参与了肾细胞癌的发展。