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本论文包括三部分内容:第一部分:Ph样急性淋巴细胞白血病的诊断流程优化及相关生物学特征研究;第二部分:CRLF2基因在急性B淋巴细胞白血病中的表达及意义研究;第三部分:四例EPOR重排的Ph样急性淋巴细胞白血病的临床及实验室研究。第一部分:Ph样急性淋巴细胞白血病的诊断流程优化及相关生物学特征研究目的:建立快速便捷的Ph样急性淋巴细胞白血病(Philadelphia-Like Acute Lymphoblastic Leukemia,Ph-like ALL)临床常规诊断流程,系统分析Ph样急性淋巴细胞白血病的临床及实验室特征。方法:首先通过流式筛选出2013年1月到2018年9月的549名B-ALL患者,再通过常规R显带技术的核型分析,荧光原位杂交(FISH)和多重PCR法排除BCR-ABL1、ETV6-RUNX1、TCF3-PBX1、MLL重排患者,最后进一步通过荧光原位杂交技术(HSH)联合多重Ph-like PCR在有标本的患者中筛选出Ph-like ALL患者,并对其中部分患者进一步检测包括JAK2、PAX5、P53突变在内的9种基因异常,最后分析Ph-like ALL的临床、分子及细胞遗传学以及预后的特点。结果:1.通过流式筛选出B-ALL患者549名,再通过核型分析、荧光原位杂交(FISH)和多重PCR法排除BCR-ABL1、ETV6-RUNX1、TCF3-PBX1、MLL重排患者289名,最后按照FISH联合定量RT-PCR在175名患者中(155名FISH标本,20名RNA标本)检测出22例患者为Ph-like ALL(均为FISH筛出),其中CRLF2重排7例,EPOR重排4例,JAK2重排2例,PDGFRB重排5例,ABL1重排3例,CSF1R重排1例。2.22例患者中,中位年龄23.5岁,中位生存期14.2个月,5例复发,9例第一次诱导未达到完全缓解(CR)。Ph-like ALL患者在21-39岁年龄段例数最多(10/22,45%),该类患者与发病年龄及第一次缓解率(P=0.047,P=0.029)呈负相关,与初诊时骨髓原始细胞比例(P=0.0348)呈正相关。3.Ph-like ALL组中,伴有JAK2突变阳性、IK6阳性及CRLF2高表达病例数明显高于非 Ph-like ALL 组(5/22,22.7%vs 2/153,1.3%,P<0.0001;6/22,27.3%vs 14/153,9.2%,P=0.012;7/22,31.8%vs 18/153,11.8%,P=0.007)。4.Ph-like ALL与非Ph-like ALL组相比较,前者总生存率(OS)和缓解期(RD)均低于后者,且有统计学差异(P=0.002,P<0.0001)。结论:1.FISH联合多重PCR是快速便捷检测Ph-like ALL的可行方法。2.22例患者中,CRLF2重排最多,占32%。3.Ph-like ALL是一种新的高危亚型,发病年龄较年轻,男性多见,化疗后MRD仍持续存在,易复发,预后差,早期发现,通过TKI等靶向药物、CART联合移植治疗,有望改善患者预后。第二部分 CRLF2基因在急性B淋巴细胞白血病中的表达及意义研究目的:探讨CRLF2基因表达与急性B淋巴细胞白血病的临床及实验室特征的相关性。方法:通过定量PCR法对2013年1月—2018年9月收入的176例初治ALL患者进行CRLF2基因表达检测,按照中位数分为CRLF2高/低表达组,部分患者进一步检测包括FLT3、JAK2、KRAS、P53突变在内的13种基因异常,分析其与临床和实验室以及疾病预后的关系。结果:1.176名患者,男93例,女83名,中位年龄27岁,CRLF2表达根据中位数分组分为高表达组(32/176,18.2%),低表达组(144/176,81.8%)。CRLF2高表达者常伴有JAK/STAT信号传导途径相关基因的突变(8/24,33.3%),而低表达组基因突变发生率较低(9/119,7.6%),两者相比,有统计学差异。(p值<0.0001)。2.CRLF2高表达与发病年龄(P=0.047)、JAK2突变呈正相关(P值<0.0001)。3.生存分析显示,IK6阳性及JAK2突变阳性的患者总生存率(OS)仅见一定趋势,都与较差预后相关,而无统计学差异(P=0.191,P=0.193),而CRLF2高表达和TP53突变与较短OS相关(P=0.021,P=0.008)。单因素分析显示:JAK2突变(P=0.003)、CRLF2分组(P=0.006)显示出统计学差异:JAK2突变阳性、CRLF2高表达患者均与较差预后相关;多因素分析显示:JAK2突变(P=0.026)、CRLF2分组(P=0.044)显示出统计学差异,其余因素均无统计学差异:JAK2突变阳性、CRLF2高表达患者的生存期均较短。4.根据CRLF2表达水平,将Ph-like ALL患者分成CRLF2高表达组和CRLF2低表达组,统计学分析显示,前者较后者OS短,并有统计学差异(P=0.011)。结论:1.CRLF2基因高表达ALL患者常伴有JAK/STAT信号通路的基因异常。2.伴有CRLF2基因高表达、JAK2突变及TP53突变的患者生存期均较短,这些指标可较好提示该类患者预后不良。第三部分四例EPOR重排的Ph样急性淋巴细胞白血病的临床及实验室研究。目的:系统分析EPOR重排的Ph样急性淋巴细胞白血病的临床及实验室特征。方法:采用R显带技术分析核型,再通过荧光原位杂交技术(FISH)验证EPOR、IGH断裂重排情况,并对1例患者使用RT-PCR技术检测EPOR基因表达情况;随访患者治疗及生存情况。结果:4例患者均在初诊时通过FISH检出EPOR重排,其中一例患者存在IGH重排。1例患者对EPOR基因进行定量PCR检测,证实其EPOR高表达。本组中3例患者仅化疗,其中2例死亡,生存期分别为6个月和27.4个月,另一例随访5.5个月后失访;1例患者确诊后加入芦可替尼,且进行CART治疗和HSCT,至今存活,随访期14.6个月。结论:EPOR重排的Ph-like ALL是一类高危亚型,可通过t(14;19)易位后形成EPOR-IGH融合。此类异常患者常具有难治性,易复发,男性占优势,预后不良等特点,但通过加入芦可替尼联合治疗可改善患者预后。