【摘 要】
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本试验参照GenBank中已发表的哺乳动物(人、大鼠、小鼠、猪、狗等)的食欲素基因保守区序列设计合成引物,以绵羊下丘脑组织总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增获得246bp的cDNA片
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本试验参照GenBank中已发表的哺乳动物(人、大鼠、小鼠、猪、狗等)的食欲素基因保守区序列设计合成引物,以绵羊下丘脑组织总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增获得246bp的cDNA片段;再根据获得的序列设计特异性引物,通过3′RACE技术获得244bp的cDNA片段,其中3′端编码区为126bp,非编码区为119bp。将两段序列拼接获得468bp的具有完整3′非编码区的cDNA序列。将该核苷酸序列与GenBank数据库中已经公布的序列进行相似性搜索,检索结果表明,与猪的同源性最高,为91.3%;与鸡的同源性最低,为55.7%;与人、鼠、狗的同源性分别为90.7%、81.7%、89.9%。应用生物信息学技术对绵羊食欲素基因cDNA序列推导的orexin A和orexin B小肽分别进行分析和预测,结果显示:绵羊的orexin A是由33个氨基酸编码的小肽,蛋白分子式为C152H249N47O45S4,分子量3583.1 u,理论等电点pI为7.90,由两个α螺旋组成,其夹角为59.1°,NH2端有两个二硫键存在;orexin B是由28个氨基酸编码的小肽,蛋白分子式为C125H213N43O35S1,分子量2910.3 u,理论等电点pI为12.30,由两个α螺旋组成,其夹角为90.3°。本试验首次成功获得具有完整3′非编码区的绵羊食欲素基因的468bp cDNA片段,为进一步克隆绵羊食欲素基因全长cDNA序列以及研究该基因在组织中的分布定位、特异表达奠定基础。
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