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目的:探讨鼻咽癌细胞中细胞周期蛋白G1(cyclinG1)、细胞周期蛋白G2(cyclinG2)基因的表达及其意义。
方法:利用细胞培养技术、免疫荧光技术检测并分析不同分化程度的鼻咽癌细胞株HNE2(B010)、CNEl(B003)中cyclinG1、cyclinG2的表达情况,逆转录聚合酶链反应技术(RT-RCR)检测HNE2、CNE1中cyclinG1-mRNA、cyclinG2-mRNA的表达水平。
①用免疫荧光法检测两株不同分化程度的鼻咽癌细胞中的cyclinG1、G2蛋白表达高低情况,采用SPSS16.00统计软件包进行数据整理和统计分析,运用统计学t检验分析cyclinG1、G2蛋白表达与鼻咽癌恶性程度之间的关系,P<0.05认为差异有统计学意义。
②用RT-RCR法研究cycliyG1、G2-mRNA在2株不同分化程度的鼻咽癌细胞中的表达情况,运用统计学t检验分析cyclinG1、G2-mRNA表达与鼻咽癌恶性程度之间的关系,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:CyclinG1蛋白在HNE2、CNE1呈现弱阳性表达,染色较弱,cyclinG2蛋白在HNE2、CNE1呈现强阳性表达,在靠近细胞膜的细胞质中染色较强,连续且均匀一致。HNE2中cyclinG1mRNA的表达水平(2.097±0.262)明显高于CNEl(0.997±0.286,P<0.01),HNE2中cyclinG2mRNA的表达水平(0.708±0.107)明显低于CNE1(1.216±0.037,P<0.01)。
①免疫荧光法检测cyclinG1蛋白在低分化鼻咽癌中表达增高,而cyclinG2蛋白表达降低。CyclinG1蛋白表达增高和cyclinG2蛋白表达降低与鼻咽癌恶性程度增加有关。组织分化程度越低,cyclinG1蛋白表达增高越明显,而cyclinG2蛋白表达降低越明显。
②应用RT-PCR法得出cyclinG1-mRNA在低分化鼻咽癌细胞的表达高于高分化鼻咽癌细胞中的表达,cyclinG2-mRNA在高分化鼻咽癌细胞的表达高于低分化鼻咽癌细胞中的表达。结论:细胞周期素G表达水平与鼻咽癌分化程度密切相关,可作为鼻咽癌恶性程度及发生、发展的指标之一。
①低分化鼻咽癌细胞中cyclinG1蛋白表达增高,cyclinG2蛋白表达降低,提示cyclinG1蛋白表达水平与鼻咽癌细胞恶性程度呈正相关,cyclinG2蛋白表达水平与鼻咽癌细胞恶性程度呈负相关,可望成为判断鼻咽癌预后的指标之一。
②低分化鼻咽癌细胞中cyclinGl在蛋白质水平及mRNA水平均有过表达,将为阐明鼻咽癌细胞细胞周期调节机制紊乱,确定鼻咽癌细胞如何获得恶性生长优势提供新的实验依据。
③本研究中cyclinG2的抑瘤作用将为研究cyclinG2抑制鼻咽上皮细胞增殖的机制提供新的思路。