盐地碱蓬SsCLC-1在硝态氮累积过程中的功能研究

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盐地碱蓬(Suaeda salsa L.)叶片能够在高盐低氮环境中累积高浓度的NO3-,由此猜测盐地碱蓬可能具有高效累积硝态氮的机制。本研究试图从生理以及分子水平来探究盐地碱蓬的硝态氮累积机制。1.不同浓度NaCl对盐地碱蓬NO3-累积的影响在0.5 mM NO3--N水平上,NaCl处理1天和7天时,200和500 mM NaCl处理时两种生境的盐地碱蓬叶片中SsCLC-1的表达量与对照组相比显著上升。相同盐浓度下,NaCl处理7天时的基因表达量与1天相比显著下降,潮间带生境盐地碱蓬的基因表达量高于内陆生境。根中SsCLC-1基因的表达量与叶片中的趋势相同。NaCl处理1天和7天,200和500 mM NaCl处理条件下两种生境盐地碱蓬叶片中NO3-的含量与对照相比呈上升趋势,潮间带生境盐地碱蓬叶片中NO3-含量高于内陆生境。根中NO3-的含量与叶片中趋势相同。上述结果表明,盐地碱蓬在高盐条件下具有较高的NO3-累积能力,SsCLC-1可能与NO3-的累积相关。这可能是不同生境盐地碱蓬在高盐低氮环境中能够正常生长的重要机制之一。2.SsCLC-1在拟南芥中的功能验证将盐地碱蓬SsCLC-1基因的CDS区连接到表达载体pCAMBIA1300,通过花序侵染得到拟南芥过量表达株系,利用潮霉素抗性筛选转基因苗,然后在分子水平上检验过表达株系,最后根据孟德尔遗传分离定律确定纯合植株,得到的纯合植株分别命名为3-107、7-129和14-172。从TAIR网站上购买拟南芥CLCb突变体SALK027349和SALK006043株系,利用双引物法进行鉴定,获得纯合植株。将获得的拟南芥突变体植株SALK006043进行盐地碱蓬SsCLC-1基因回补,方法同筛选拟南芥过表达株系,得到回补T1代种子。分别将野生型、过表达和突变体拟南芥的种子种在蛭石中,用0.5 mM NO3--N溶液浇灌,生长约一个半月后,分别用0和50 mM NaCl处理。培养7天后,进行相关指标测定。结果表明,在0.5 mM NO3--N水平,0和50 mM NaCl处理下,拟南芥过表达株系的基因表达量显著高于野生型和突变体株系(SALK006043)。盐胁迫时,过表达植株的基因表达量显著上调;0 mM NaCl处理下野生型和突变体的基因表达量没有显著差异。盐胁迫时,突变体植株的基因表达量显著低于野生型和过表达植株。0和50 mM NaCl下,拟南芥过表达植株叶片的NO3-含量高于野生型和突变体植株。无论是0 mM还是50 mM NaCl处理下,野生型的NO3-含量高于突变体植株。盐胁迫下,过表植株的NO3-含量显著增加,而突变体的NO3-含量变化不显著。上述结果表明SsCLC-1在盐地碱蓬和转基因拟南芥NO3-累积中发挥重要作用。
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