论文部分内容阅读
目的:卵巢癌(Ovarian cancer)是女性生殖系统中常见恶性肿瘤之一,死亡率占妇科肿瘤第1位,其发病隐匿,早期无典型症状,临床发现多为中晚期,死亡率高,预后极差,严重威胁妇女生命。上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)是卵巢癌最常见的病理类型,占卵巢癌80-90%,其中以浆液性卵巢癌最常见。据统计,70%的浆液性卵巢癌患者就诊时已处于晚期。本课题旨在通过对上皮性卵巢癌外泌体的提取、流式细胞术检测外泌体蛋白标志物EpCAM、CD44和CD9的水平,验证本研究实验方法在上皮性卵巢癌外泌体蛋白标志物研究的可行性、实用性,为后期上皮性卵巢癌外泌体蛋白标志物检测体系的建立提供依据,进而为后期建立卵巢癌多元逻辑回归风险预测模型来用于检测、预测(早期)卵巢癌,提高上皮性卵巢癌患者早期检出率,辅助卵巢癌临床诊断,提高生存率。方法:本研究选取四川绵阳市中心医院妇产科2016年8月1日至2018年11月1日收治的初次诊断并未接受过放、化疗和肿瘤免疫治疗上皮性卵巢癌患者31例为研究组(术后FIGO分期为Ⅰ期9例,Ⅱ期16例、ⅢA期6例);卵巢良性肿瘤(卵巢浆液性、黏液性囊腺瘤、卵巢畸胎瘤或卵巢巧克力囊肿的患者,术前近6个月未服用过雌、孕激素类药物)患者40例;健康体检(近6个月未服用过雌、孕激素类药物)患者40例为对照组;抽取入组患者静脉血液4ml,提取血浆,通过外泌体提取液提取血浆来源外泌体;电镜检测外泌体提取情况,流式细胞术检测外泌体蛋白标志物EpCAM、CD44和CD9水平情况,比较各组间水平差异,所有数据用SPSS22.0软件统计数据,使用(x±sem)表示计量资料,组间比较使用t检验和方差分析,用Holm-Sidak method,with alpha=5.000%进行显著性分析。P<0.05表示差异有统计学意义。结果:电镜检测可见通过外泌体提取液提取的外泌体有完整的膜结构,大小不均匀,直径约30~100 nm,流式细胞术检测统计比较,可见上皮性卵巢癌患者的血浆EpCAM+%、CD44+%和CD9+%水平均高于卵巢良性疾病组、健康对照组,差异有显著性意义(P<0.05);卵巢良性疾病组的血浆EpCAM+%、CD44+%水平与健康对照组差异有显著意义(P<0.05),卵巢良性疾病组的血浆CD9+%水平与健康对照组差异无显著差异(P>0.05)。虽卵巢良性疾病组的血浆EpCAM+%、CD44+%水平与健康对照组差异有显著意义,但上皮性卵巢癌患者的血浆EpCAM+%、CD44+%水平分别为(95.22±0.311)%、(92.62±0.409)%明显高于卵巢良性肿瘤组(91.68±0.375)%、(89.46±0.428)%;结论:本研究通过对上皮性卵巢癌外泌体的提取及蛋白标志物的检测,结果证实EpCAM、CD44和CD9在上皮性卵巢癌中表达水平高于卵巢良性组及健康对照组,虽EpCAM、CD44表达水平在卵巢良性肿瘤组与健康对照组中有显著差异,但癌组中其表达水平明显较良性肿瘤组高;较目前现有外泌体提取及表面标志物的检测方法比较而言,本研究体系中实验样本获取简单、可重复利用占有明显优势,其获取的外泌体通过流式细胞术检测可反复检测不同肿瘤标志物并测定其含量。因此说明本实验方法用于上皮性卵巢癌外泌体蛋白的提取、检测,后期通过本研究实验方法检测多种蛋白标志物,建立上皮性卵巢癌蛋白标志物体系,为后期建立卵巢癌多元逻辑回归风险预测模型来用于检测、预测(早期)卵巢癌、临床诊断重要辅助检测。