HL-60细胞凋亡的衍射图像量化参数初步研究

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细胞凋亡是生物体维持正常生理功能的重要机制,是一系列基因调控下的细胞死亡途径。自1972年Kerr等人首次提出细胞凋亡的概念后,对细胞凋亡发生机理和途径的研究已经成为国内外生命科学以及医学研究中方兴未艾的热点。经过几十年的研究,细胞凋亡在医学领域中的作用逐渐被揭开。细胞凋亡与细胞的增殖、衰老、癌变及许多疾病的发生密不可分。尤其在各种癌症的治疗过程中,癌细胞的增殖状态、敏感性、转移倾向及复发几率均与凋亡指数相关。随着生物检测技术的不断发展,细胞凋亡的检测方法也日趋精密,根据凋亡过程中细胞的形态及生化特征的变化,可以将检测方法分为形态学检测法、免疫组化检测法及生化检测法。这些方法可以从定性或定量的角度反映出细胞凋亡过程中的特征变化,有助于人类对凋亡引起的相关疾病进行诊断与治疗。基于细胞凋亡的基本理论知识以及现有检测方法存在的不足,本文提出了基于衍射成像式流式细胞仪和灰度共生矩阵(GLCM)的方法对HL-60细胞进行凋亡衍射图像量化参数分析。主要工作如下:本文利用活性氧H2O2诱导饥饿同步化后的HL-60细胞作为研究样本,首先利用传统的荧光流式细胞仪检测不同诱导时间下的细胞凋亡率,分析其曲线变化规律。其次,利用Hoechst 33342、Annexin V-FITC/PI三种荧光试剂对样本进行染色,拍摄二维荧光图像,统计不同时间点的细胞凋亡情况,并利用Xcellence软件进行二维参数的定量提取及显著性分析。继而,本文利用衍射成像式流式细胞仪获取样本侧向散射光的水平偏振光和垂直偏振光的分布图像,对其进行预筛选后提取GLCM特征参数,利用主成分分析法对34个特征参数进行初步分析后,研究了GLCM特征参数随凋亡诱导时间的变化规律及与细胞结构变化的联系。最后,本文对比了三种凋亡检测方法的结果,综合分析了三种结果之间的相关性,并提出了后续研究的可行性内容。
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