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[目的]肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)是浸润在肿瘤组织内的免疫炎性细胞,在肿瘤的发生、进展中发挥着重要作用。研究者发现子宫内膜癌(endometrial carcinoma, EC)组织中有大量TAMs的浸润],并与患者的预后不良呈正相关。随着中药抗肿瘤优势作用的突出,抗肿瘤中药逐渐成为研究热点。然而关于直接以TAMs为靶点的中药复方有效作用“基团”和中药单体化合物的研究证据较少,且‘TAMs在子宫内膜癌的发生、进展中的作用和中药抗子宫内膜癌的分子机制同样不明确。北京中医药大学东直门医院妇科名老中医-郭志强教授经过多年临床经验,总结出治疗子宫内膜癌的有效方药--连花汤,临床上常以此辨证加减,疗效显著。本研究首先采用免疫组化方法对子宫内膜增生症(endometrial hyperplasia, EH)及子宫内膜癌患者病理组织中TAMs的存在及分布特点进行观察,探讨TAMs与子宫内膜癌进展的相关性。其后我们以体外诱导TAMs活化模型为基础,明确TAMs对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响。最后主要通过提取的可能有抗肿瘤作用的连花汤复方有效作用“基团”和中药单体化合物对与TAMs共培养的Ishikawa细胞的作用影响,筛选对TAMs有抑制作用的连花汤有效作用“基团”及其各中药单体化合物,并初步探讨中药体外抗EC的作用及分子机制,从而为日后研究以TAMs为靶点的抗EC的中药复方或中药单体提供临床及实验依据。1IHC检测临床EH及EC患者石蜡切片中TAMs的分布特点和NF-κB p65的表达。2通过人子宫内膜癌Ishikawa细胞与人巨噬细胞U937共培养体系体外诱导TAMs活化模型；FCM检测CD163、CD206表型分子的表达以检验模型成立；MTT方法观察TAMs对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖作用的影响。3 MTI方法检测连花汤复方有效作用“基团”及其各中药单体化合物对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响,筛选具有抗子宫内膜癌Ishikawa细胞的连花汤复方有效作用“基团”及其各中药单体化合物及其各自最佳药物浓度及作用时间；FCM检测CD163、CD206表型分子的表达；Elisa方法检测中药作用下细胞上清液中IL-10的表达；Western Blot方法检测中药作用下NF-κB p65蛋白的表达；real-time RT-PCR方法检测中药作用下TAMs活化过程中TLR4/MyD88信号转导通路的表达。[结果]1子宫内膜组织中CD163和CD206分子在不同级别的EH组织中的细胞质中表达,在EC组织的癌巢和间质中呈散在片状或灶状分布。CD163和CD206的表达随EC的进展而增高(p<0.05)。CD163和CD206在ECⅡ期组织中的表达高于Ⅰ期,差异具有统计意义(p<0.05)；且在≥>1/2肌层浸润的EC组织的表达高于<1/2肌层浸润的组织(p<0.05)。2正常子宫内膜、ESH、ECH、EAH及EC五组患者在年龄、绝经状态、月经情况和合并原发性不孕史、糖尿病情况、恶性肿瘤家族史等高危因素方面,各组间无明显差异(p>0.05)；EC患者同时合并有高血压或肥胖疾病的人群比例稍高于EH患者(p<0.05)。3子宫内膜组织中NF-κB p65的表达随着EC的进展呈升高趋势(P<0.05),且在EC 1期组织中表达低于Ⅱ期EC组织(p<0.05)；同时在≥>1/2肌层浸润的子宫内膜组织中表达较<1/2肌层浸润者明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4共培养组CD163和CD206表达均高于U937对照组(p<0.05)；而在连花汤、白花蛇舌草、半枝莲黄酮组三组中表达较TAMs对照组明显下降,CD206在各组之间具有统计学差异(p<0.05)；连花汤黄酮组较其他两中药组下调两种分子的水平更加明显(P<0.05)。5分别培养24和48h后,TAMs+Ishikawa组较Ishikawa组的增殖率明显增高(P<0.05)；连花汤、白花蛇舌草和半枝莲黄酮不同药物浓度干预Ishikawa细胞24h和48h后,各组抑制率在一定范围内呈浓度依赖性；连花汤黄酮、白花蛇舌草黄酮和半枝莲黄酮药物浓度分别在800μg/ml、800μg/ml、400μg/ml,作用24h时对Ishikawa细胞的抑制作用最明显(p<0.001)；而连花汤多糖、白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和黄芪多糖不同药物浓度对Ishikawa细胞作用24h和48h后,抑制率均不超过15%,甚至为负值(P>0.05)。6 IL-10在TAMs对照组中表达较U937空白组明显增加(P<0.05),在连花汤黄酮组、白花蛇舌草黄酮组、半枝莲黄酮组三组中表达较TAMs对照组明显下降,各组之间具有统计学差异(P<0.05)；以连花汤黄酮组下调该分子表达最明显(P<0.05)。7 NF-κB p65在TAMs对照组中的表达明显高于U937空白组(P<0.05)；连花汤黄酮组、白花蛇舌草黄酮组、半枝莲黄酮组能明显下调TAMs中NF-κB p65蛋白的表达,以连花汤黄酮组下调幅度最大,白花蛇舌草黄酮组次之,差异具有统计学意义(P<0.05)。8 TAMs对照组TLR4/MyD88的表达较U937空白组增高(P<0.05),而连花汤、白花蛇舌草和半枝莲黄酮三组中的表达较TAMs对照组明显下降(P<0.05)；TLR4/MyD88 表达下调程度连花汤组大于白花蛇舌草和半枝莲黄酮组,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]1 TAMs在子宫内膜组织中的浸润程度随着子宫内膜病变程度的增加而增加,TAMs可能有促进子宫内膜癌进展的作用。2通过人子宫内膜癌Ishikawa细胞与人巨噬细胞U937细胞共培养可以成功诱导TAMs活化模型;推断TAMs有促进人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的作用。3连花汤黄酮、白花蛇舌草黄酮和半枝莲黄酮可能是通过阻断TLR4/MyD88信号转导通路来抑制TAMs的活化,从而起到抗子宫内膜癌的作用。