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背景与目的:神经干细胞(neural stem cells,NSCs)指具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力,能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。因神经干细胞具备自我更新和多分化潜能的两个基本特性,以及迁移功能、低免疫性和良好的组织融合性的优点,故而成为细胞移植治疗神经系统疾病良好的移植材料,但是如何体外获得并分选出高纯度的神经干细胞便成为其推向临床治疗关键。在前期的实验中,我们发现:在成纤维细胞在转分化为神经干细胞的过程中,CD133这一细胞表面膜蛋白的表达量在前5天呈现出显著升高的趋势,其后维持高表达状态。所以本课题旨在确定CD133这一蛋白能否作为成纤维细胞转分化为神经干细胞过程中的筛选标记,从而为体外分选高纯度神经干细胞提供理论依据,也为进一步研究转分化机制及神经干细胞应用奠定良好的基础。材料与方法:取65天的猕猴耳部组织获得成纤维细胞,在35mm的小皿中用包含Sox2、Oct4和Klf4三个转录因子的逆病毒感染3×104个新生猴成纤维细胞两次。第三天用胰酶消化,往铺过5 mg/mLlaminin的一个六孔板中接入l× 105个细胞,并加入3 mL诱导培养基。在诱导第5天和第七天,分别去掉Y27632和丙戊酸,在第11天时换为神经干细胞培养基。期间,对每一天的细胞进行CD133的免疫荧光染色,观察CD133的表达情况。在第七天时,对细胞进行CD133流式分选,分别收集阳性细胞和阴性细胞继续培养,并进行神经鉴定。结果:(1)用Sox2、Oct4和Klf4的逆转录病毒感染成纤维细胞后,每一种病毒的感染效率基本都达到了 80%。(2)虽然随着天数的增加,由于细胞大量死亡,CD133的表达有一定增强,但其表达量在宏观上并没有显著增多。(3)经鉴定,在转分化第7天利用流式细胞术分选出的CD133阳性细胞群可以成功转分化为神经干细胞,而CD133阴性细胞不能转分化为神经干细胞。结论:CD133可以作为成纤维细胞转分化为神经干细胞过程中的筛选标记。