【摘 要】
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目的:原核表达多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2全长编码序列;模拟多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域三维结构。方法:用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序
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目的:原核表达多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2全长编码序列;模拟多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域三维结构。方法:用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化BL21大肠杆菌,IPTG诱导表达该融合蛋白;利用SWISS-MODEL服务器对多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域同源建模并通过结构比对寻找其活性位点。结果:构建了原核表达重组载体pGEX-4T-1-T2,SDS-PAGE检测到一分子量为90.7KD融合蛋白的表达,与理论计算值相符;ppGalNAc-T2蓖麻蛋白样结构域二级结构主要为β链,采用的是β-三叶草折叠方式,ASN4、ASP7、ASN28三个氨基酸可能为其糖结合活性位点。结论:本研究成功表达了ppGalNAc-T2全长编码序列,为进一步测定其酶活性打下基础;得到了ppGalNAc-T2蓖麻蛋白样结构域的模拟三维结构,为该结构域在酶活性中可能的作用提供了依据。
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