【摘 要】
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目的:建立分离大鼠肠系膜淋巴管的技术及其内皮细胞的培养方法并鉴定及证实体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞具有合成一氧化氮的能力,并测定其部分电生理学特性.方法:利用
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目的:建立分离大鼠肠系膜淋巴管的技术及其内皮细胞的培养方法并鉴定及证实体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞具有合成一氧化氮的能力,并测定其部分电生理学特性.方法:利用手术显微镜及显微手术器械分离大鼠肠系膜淋巴管,采用植块培养法进行内皮细胞原代培养并传代培养.用免疫组织化学的方法鉴定体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原及检测一氧化氮合酶的表达.用膜片钳技术检验其电生理学特性,观察加入4-AP后特性变化.结果:体外原代及传代培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列.第Ⅷ因子相关抗原的免疫过氧化氢酶染色反应阳性,阳性率98﹪.一氧化氮合酶的表达的阳性率为83﹪,阳性反应产物在细胞核周围呈棕黄色.电生理记录显示静息电位为-12.96±0.31 mV,超射值为48.96±6.56mV,APD<,50>为59.08±6.55ms,APD<,90>为95.68±2.28ms,加入4-氨基吡啶后以上各值均增加(n=10,p<0.01).并且其具有内向电流特性,而且4-氨基吡啶不能改变(n=7,p>0.05).未发现有电压依赖性钙通道.结论:该实验的培养方法简单,可靠并证实了体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞能表达一氧化氮合酶,即在体外培养的情况下具有合成一氧化氮的能力.初步确定其动作电位及部分电流特性,加入4-AP后动作电位时程增加,其它电流特性未改变.
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