紫锥菊多糖的分离纯化、结构鉴定及生物活性研究

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植物多糖具有抗氧化、抗糖化、抗病毒、治疗糖尿病以及抗炎的功效。作为在欧美有着悠久药用史的植物,紫锥菊所含的粗多糖被证实具有良好的抗炎及免疫调节功效,但其精多糖的相关活性还未见深入研究报道。本论文采用新鲜的紫锥菊(Echinacea purpurea(Linn.)Moench)地下部分为原料,对其进行粗多糖的提取、分离、纯化和结构方面的较系统的研究以及相关生物功能的测试。其主要研究结果如下:1、紫锥菊多糖的结构解析紫锥菊地下部分经过水煎醇沉得到的粗多糖,进行脱脂、脱蛋白、脱色素、去除小分子等初步纯化后,利用DEAE-Sepharose FF柱进一步分离纯化,得到四个多糖的组分:EPDS-1、EPDS-2、EPDS-3、EPDS-4,其中EPDS-2的洗脱量最大,每批洗脱量约70mg左右。通过高效凝胶渗透色谱检测,EPDS-2为分子量相对均一的多糖,其出峰时间在24min左右,相对分子量为3.8×104Da,分散指数在1.8左右。在紫外吸收光谱下扫描四个多糖组分,其中EPDS-4在260nm和280nm处有吸收峰,为糖蛋白。EPDS-1、EPDS-2、EPDS-3均不含蛋白质和核酸。利用核磁共振波谱仪对这四种组分进行氢谱检测,发现EPDS-1和EPDS-2的异头氢的位移位置大致相同,糖苷键的数量相同,可能为同一种糖,且EPDS-1含有其他成分。EPDS-3和EPDS-4的核磁氢谱显示,其异头氢的位移和糖苷键的数量相似。2、紫锥菊多糖相关的生物活性研究(1)紫锥菊多糖的抗氧化能力。DPPH·自由基的清除能力测试和OH·自由基清除能力测试结果均显示,紫锥菊四种多糖组分,除EPDS-1外,EPDS-2,EPDS-3,EPDS-4均有一定的DPPH·自由基和OH·自由基清除能力,其中EPDS-4在不同浓度(0.5,1,2,4,8mg/m L)对DPPH·自由基清除率均高于同等浓度的维生素c(阳性对照品),浓度4mg/m L以上时对OH·自由基清除率也高于同等浓度的阳性对照品,且均具有明显的量效关系。(2)紫锥菊多糖的抗糖化效果。α-葡萄糖苷酶抑制活性和α-淀粉酶活性抑制实验均显示四种紫锥菊多糖组分除EPDS-2外,其余各种多糖的抗糖化效果均较弱,与阳性对照氨基胍的抗糖化率差异显著。EPDS-2抗糖化率最高接近阳性对照的1/2,但具有一定的量效关系。(3)紫锥菊多糖的抗炎效果。测定了不同浓度的四种紫锥菊多糖组分对J774A.1细胞株分泌促炎因子TNFα、IL-6和抗炎因子IL-10的影响,发现各组多糖组分一定程度上均有降低LPS引起的促炎因子TNFα分泌,同时具有增加抗炎因子IL-10分泌的效果,对于改善LPS引起的促炎因子IL-6分泌无明显效果,综合分析,EPDS-2的抗炎效果最好,在0.1mg/m L时,就具有较明显的增加IL-10分泌的效果,在浓度≥0.4mg/m L时,与地塞米松阳性对照的效果相当,1mg/m L时效果超过了阳性对照组。在浓度为0.4mg/m L时,对于降低LPS引起TNFα水平的效果与阳性地塞米松对照相当,在浓度为≥0.4mg/m L时,效果好于阳性对照品。
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