论文部分内容阅读
目的检测正常孕妇及子痫前期患者胎盘中maspin基因的表达情况,探讨maspin基因在子痫前期发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学法检测正常孕妇和子痫前期患者胎盘中maspin基因的蛋白表达情况,并采用RT-PCR法检测maspin基因的mRNA表达水平。结果1. maspin蛋白在子痫前期患者及正常孕妇胎盘组织中均有表达,主要位于合体滋养细胞、细胞滋养细胞及内皮细胞胞浆中。2.子痫前期组胎盘中maspin mRNA表达水平与正常组相比明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。两组孕妇年龄、身高、孕龄、胎儿Apgar评分和体重均无统计学差异。结论胎盘组织中maspin基因主要表达在滋养细胞,子痫前期患者胎盘maspin表达明显升高。我们推测maspin基因表达水平的异常可能参与了子痫前期的发生。第二部分缺氧对绒毛外滋养细胞maspin表达及生物学行为的影响目的体外实验研究缺氧状态对绒毛外滋养细胞1naspin表达及生物学行为(增殖、迁移、凋亡)的影响,探讨maspin基因参与子痫前期发病的机制。方法利用化学物质二氯化钴建立细胞缺氧模型,采用细胞免疫组化、实时荧光定量PCR、CCK8细胞增殖实验、Transwell细胞迁移实验和细胞凋亡检测研究绒毛外滋养细胞maspin蛋白的表达变化及对绒毛外滋养细胞生物学行为(增殖、迁移和凋亡)的影响。结果1. maspin蛋白在绒毛外滋养细胞株TEV-1中明显表达,主要位于细胞浆2.与正常对照组相比,缺氧组中绒毛外滋养细胞的maspin的mRNA表达明显增加；增殖能力和迁移能力明显下降,凋亡显著增加。结论缺氧状态下滋养细胞maspin表达增加,其浸润性行为明显受到抑制,这与子痫前期胎盘中1naspin表达情况及滋养细胞侵袭能力下降的现象一致,因此推测maspin基因表达异常与滋养细胞的浸润性能力改变相关,参与子痫前期的发病机制。第三部分maspin基因的表观遗传学调控在子痫前期发病机制中的研究目的利用脱甲基化药物(5-Aza-dC)研究绒毛外滋养细胞生物学行为(增殖、迁移和凋亡)的变化,探讨maspin基因的表观遗传学调控在子痫前期发病机制中的作用。方法采用实时荧光定量PCR、CCK8细胞增殖实验、Transwell细胞迁移实验和Annexin/PI凋亡检测等方法检测脱甲基化药物对绒毛外滋养细胞的maspin mRNA表达及增殖、迁移和凋亡的影响。结果1.与PBS对照组相比,5-Aza-dC组中绒毛外滋养细胞的maspin mRNA表达显著升高,迁移能力明显下降,而增殖和凋亡率没有明显改变。2.与缺氧组相比,缺氧+5-Aza-dC组中绒毛外滋养细胞的maspin mRNA表达明显降低,早期凋亡率有一定程度的降低,但增殖能力没有明显改变结论脱甲基化药物使绒毛外滋养细胞的maspin表达明显增加,并抑制其迁移能力；同时抑制了缺氧导致的绒毛外滋养细胞凋亡的增加,提示了表观遗传学调控在子痫前期胎盘浅着床发生机制中的作用,并为子痫前期的早期诊断和治疗提供了新的潜在的研究方向。