【摘 要】
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目的:观察钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用。 方法:乳鼠原代心肌细胞培养4-5d后,随机分为五组:正常对照组(N组),缺氧/复氧组(H/Re组),阻断剂
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目的:观察钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用。
方法:乳鼠原代心肌细胞培养4-5d后,随机分为五组:正常对照组(N组),缺氧/复氧组(H/Re组),阻断剂组,激动剂组和Caffeine组。采用饱和氮气PH6.8的D-Hands液培养细胞3h,再用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞9 h,复制心肌缺氧/复氧模型。检测复氧液中LDH活力、MDA含量;MTT比色法、HE染色法、Hoechest33342染色、TUNEL染色和流式细胞仪检测心肌细胞存活率和凋亡率;Western Blot检测心肌细胞Caspase-12、CaSR、Caspase-3、Calpain、Orp78、SERCA蛋白表达水平;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞内游离钙的变化。
结果:缺氧/复氧组和激动剂组LDH活力、MDA含量、细胞内游离钙浓度均高于对照组;同时,HE染色、Hoechest33342染色、TUNEL染色和流式细胞仪检测的细胞凋亡率也明显高于对照组;Western Blot检测Caspase-12、Caspase-3、Calpain、CaSR和Orp78的表达缺氧/复氧组和激动剂组明显高于对照组。反之, SERCA的表达和细胞存活率低于对照组。
结论:心肌缺氧/复氧过程中,钙敏感受体表达增多,从而破坏了细胞内钙稳态诱发过度的内质网应激,通过Caspase-12等凋亡蛋白表达的增多等途径引起心肌细胞凋亡。
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