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目的:
以正常鼻咽上皮细胞NP69作参照，建立人鼻黏膜原代上皮细胞模型，探索脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)对人鼻黏膜上皮细胞诱导hBD-2的可表达性和差异性，以及不同浓度与诱导hBD-2表达的强弱和持续时间的关系。
方法:
1.采用人下鼻甲黏膜，以Ⅰ型胶原酶加胰酶消化法分离上皮细胞，用添加了生长因子和牛下丘脑提取物的Keratinocyte-SFM培基，在体外培养原代鼻黏膜上皮细胞，并通过免疫细胞化学法对培养的鼻黏膜上皮细胞和复苏的NP69细胞进行细胞角蛋白鉴定。
2.应用PCR和免疫细胞化学技术检测脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)诱导鼻黏膜上皮细胞和NP69细胞中hBD-2的表达量。
结果:
1.体外培养的人鼻黏膜原代细胞经细胞角蛋白AE1/AE3鉴定为上皮细胞，阳性率高达92.97％，较NP69细胞高;
2.不同质量浓度的LPS(1、10mg/L)、TNF-a(0.1、1、10、100ng/ml)刺激人鼻黏膜上皮细胞4h后，hBD-2mRNA表达呈剂量依赖性升高，两两比较差异显著(p＜0.05)。
3.不同质量浓度的LPS(0.01、0.1、1、10mg/L)、TNF-a(0.1、1、10、100ng/ml)刺激人鼻咽上皮细胞(NP69)4h后，hBD-2mRNA表达均较对照组（未刺激组）降低，两两比较差异显著(p＜0.05)。
4.一定浓度的LPS(10ug/ml)刺激培养的鼻黏膜上皮细胞，hBD-2mRNA的表达量0-4h逐渐升高，4-24h逐渐下降，两两比较差异显著(p＜0.05);一定浓度的LPS(10ug/ml)刺激培养的NP69不同时间后，hBD-2mRNA的表达量无明显增加，两两比较无明显差异(p＞0.05)5.一定浓度的LPS(10ug/ml)、TNF-a(100ng/ml)刺激培养的鼻黏膜上皮细胞和NP69细胞4h后，免疫细胞化学证实鼻黏膜上皮细胞胞浆中hBD-2蛋白表达;NP69细胞胞浆基本无hBD-2蛋白表达。
结论:
1.本实验用K-SFM培基成功培养了人鼻黏膜上皮细胞。
2.脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)两种不同的诱导因素均可诱导人鼻黏膜上皮细胞中hBD-2的表达，这种表达不仅具有差异性，而且具有剂量依赖性和时间依赖性。
3.相同剂量的LPS诱导鼻黏膜上皮细胞和NP69细胞两种不同细胞hBD-2的表达时，其时效性不同。