目的观察糖尿人来源的成骨细胞与胰岛素对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响，探讨人脐带间充质干细胞治疗糖尿病人骨折愈合延迟的可行性。方法一、成骨细胞的分离与培养：利用胶原酶消化法分离培养人成骨细胞，利用碱性磷酸酶钙钴法染色、Ⅰ型胶原蛋白免疫细胞化学染色、钙结节茜素红染色鉴定成骨细胞的特性。二、成骨细胞对脐带间充质干细胞成骨分化的影响：利用Transwell细胞培养板，间接共培养成骨细胞与脐带间充质干细胞。实验分三组，A组上室不加细胞作为阴性对照组；B组上室内放置非糖尿病人来源的成骨细胞；C组上室内放置糖尿病人来源的成骨细胞；三组下室内均放置人脐带间充质干细胞。采用CCK-8法于第一周内观察脐带间充质干细胞的生长增殖情况；第10天时行免疫荧光染色，观察Ⅰ型胶原蛋白的表达情况；第7、10、14天时利用细胞碱性磷酸酶活性比色法观察脐带间充质干细胞内的碱性磷酸酶活性表达情况；利用RT-PCR的方法在第21天时，观察脐带间充质干细胞内骨钙素mRNA的相对表达量。三、胰岛素对脐带间充质干细胞分化的影响：实验分为胰岛素处理组与非胰岛素处理组，利用CCK-8法观察脐带间充质干细胞的增殖情况；细胞碱性磷酸酶活性比色法比较脐带间充质干细胞内碱性磷酸酶活性；RT-PCR法比较脐带间充质干细胞内Ⅰ型胶原蛋白mRNA、骨钙素mRNA的相对表达量。结果一、所培养的细胞表达碱性磷酸酶，Ⅰ型胶原蛋白和钙结节，符合成骨细胞的特征，同非糖尿病人来源的成骨细胞相比，糖尿病人来源的成骨细胞表达的碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白、钙结节量少。二、A组的脐带间充质干细胞的增殖较慢；B、C组的脐带间充质干细胞增殖较快，B组的细胞数量多于A、C两组，三组间的差异具有统计学意义（P<0.05）。三、脐带间充质干细胞在第10天时行Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光染色，A组为阴性，B、C组呈阳性，B、C两组间的差异无统计学意义（P>0.05）。四、A组碱性磷酸酶活性一直处于低表达状态，同A组相比，B、C组碱性磷酸酶活性增加，10天时达到高峰，14天时表达降低，B、C组碱性磷酸酶活性表达趋势相同，但C组表达量低，三组间的差异具有统计学意义（P<0.05）。五、在第21天时，RT-PCR检测发现B、C组的脐带间充质干细胞内表达骨钙素基因，A组未检测到骨钙素基因的表达，C组表达量低于B组表达量，三组间的差异具有统计学意义（P<0.05）。六、同非胰岛素处理组相比，胰岛素处理组脐带间充质干细胞的增殖加快，碱性磷酸酶活性增高，Ⅰ型胶原蛋白基因、骨钙素基因表达量高，两者间的差异具有统计学意义（P<0.05）。结论糖尿病人来源的成骨细胞虽然功能受损，但是具有诱导脐带间充质干细胞成骨分化的能力，其诱导分化作用略差于非糖尿病人来源的成骨细胞。胰岛素不仅能够促进受损成骨细胞的功能恢复，并且促进脐带间充质干细胞的增殖和成骨分化。因此推测脐带间充质干细胞联合胰岛素移植在促进糖尿病人的骨折修复领域中具有积极的作用。