白僵菌液体深层培养的研究

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本文对白僵菌的液体深层培养进行研究,并用液生分生孢子对马尾松毛虫进行室内毒力测定,且与白僵菌的气生分生孢子作对比,以期找到促进白僵菌液生分生孢子形成的培养环境与培养条件,为白僵菌的液体深层发酵生产提供科学依据。通过对6个不同菌株的球孢白僵菌在25℃,振荡频率为130r/min,168h的恒温摇床中液体培养,结果表明:白僵菌Bb187、Bb13、Bb03液生分生孢子数相对比于其他三个菌株较高,而且高峰期为108h-144h,且120h时达到最高值。芽生孢子也是Bb187、Bb13、Bb03的孢子数比另外三个的高得多,且高峰期为48h-120h。6个菌株的生物量中,Bb187的最高,Bb13与Bb05次之,其他三个差异不大。因此我们选出Bb187和Bb13为下面液体深层培养的主要供试菌种,且液体培养的时间定为120h。不同氮源、不同碳源对白僵菌液生分生孢子的形成具有显著的影响。花生饼、花生粉、黄豆粉、(NH42SO4是较好的氮源。蔗糖和葡萄糖是较好的碳源。对于芽生孢子的形成,花生饼、黄豆粉和(NH42SO4是促进产孢的氮源,而碳源则因菌株的不同而有所差异。不同氮源对生物量的影响有显著的差异,花生饼具有较高的生物量,而黄豆粉次之。不同碳源中,马铃薯淀粉具有较高的生物量。但是,蔗糖与葡萄糖与之差异不大。氮源和碳源的含量对白僵菌液体深层培养形成分生孢子有重要的影响。当氮源不变,变化碳源含量时,碳源为120g/L-35g/L时能够产生较多的液生分生孢子,碳源为15g/L-30g/L时能产生较多的芽生孢子,碳源为35g/L-45g/L时能够得到较大生物量。当碳源不变,变化氮源含量时,氮源为10g/L-25g/L时能够产生较多的液生分生孢子,同时也能够产生较多的芽生孢子,氮源为20g/L-50g/L时能够得到较大的生物量。在培养基中,加入适量的生长辅助因子,对液生分生孢子、芽生孢子和生物量均能有效的促进生长。VB6+VB1+VB2和复合维生素B可产生较高的液生分生孢子,复杂的维生素成分比单一的维生素更有利于液生分生孢子的形成。VB6+VB1+VB2得到最大的芽生孢子数,而复合维生素B次之。VB6+VB1+VC可得最大生物量。加入不同的微量元素对白僵菌液体培养有重要的意义。同时加入六种微量元素能得到液生分生孢子的产孢量最大值。加入单一的微量元素时,Mo元素更有利于液生分生孢子的形成。而对于芽生孢子,Mn元素具有重要的作用。加入不同的微量元素对生物量有重要影响。其中,加入Mo能够得到最大生物量。同时加入六种微量元素也能达到较高的生物量。温度对于分生孢子与生物量的形成有显著影响,25℃-28℃是液生分生孢子形成的最适温度范围,也是芽生孢子产孢量最高的最适温度范围,同样也是能产生最多生物量的温度范围。光照对分生孢子的形成也有较大的影响,半光照是最利于液生分生孢子的形成,全黑暗次之。而芽生孢子的形成则偏向于全黑暗与半光照。至于生物量,半光照的生物量较高,全黑暗次之,全光照的生物量最低。可见,全光照不利于分生孢子的形成。培养液的pH值显著影响白僵菌的产孢与菌丝生长。当pH值为6.5-7.0时,最利于液生分生孢子的生长;当pH值为6.0-7.0时,最利于芽生孢子的生长;当pH值6.0-7.0时能取得较高的生物量。不同的装液量对于白僵菌液体培养的分生孢子和菌丝的形成具有显著的影响。当装液量为20ml-50ml时,液生分生孢子有较高的产孢率,当为40ml时,产孢率最高。当装液量为30ml-50ml时,芽生孢子有较高的产孢率,其中装液量为50ml时,产孢率最高,最利于芽生孢子的生成。当装液量为40ml-60ml时,最有利于菌丝的生长,得到较高的生物量。其中当装液量为50ml时,生物量最高。不同的吐温含量中,白僵菌的生长有所差异。在吐温含量低于0.4%时液生分生孢子的产孢量较低,0.4%-0.8%时液生分生孢子的产孢量较高。当吐温含量在0.2%-1.0%时,芽生孢子的产孢量较大,小于0.2%或者是大于1.0%时芽生孢子的产孢量较小。当吐温含量为0.1%-1.0%时,生物量较大。供试球孢白僵菌4个菌株(Bb187、Bb13、Bb03、Bb10),液生分生孢子对马尾松毛虫的死亡率与气生分生孢子对马尾松毛虫的死亡率相近。液生分生孢子的致死中浓度,与相对应的气生分生孢子的致死中浓度差异不大,液生分生孢子的致死中浓度比气生分生孢子的稍低。液生分生孢子和气生分生孢子对马尾松毛虫的致死中时间无较大的差异,毒力相当。
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