鹅圆环病毒实验性感染的临床、病理学观察和血清学检测

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鹅圆环病毒(Goose Circovirus, GoCV)是近年来发现的圆环病毒科的一个新成员,常潜伏感染,侵染淋巴细胞等增殖速度快的细胞,引起免疫力下降,导致动物对多种条件性致病菌的二次感染易感性增加,而出现临床发病。为研究GoCV的致病性,我们进行了实验室感染试验。取某阳性鹅场外观健康鹅的法氏囊,经PCR检测确认为GoCV感染阳性。法氏囊样品经称量,加适量生理盐水匀浆,再进行两次冻融,离心取上清,用头孢曲松钠4℃处理过夜,最后稀释成1:10的病毒悬液,作为GoCV感染用样品。取象山某阴性鹅场1日龄雏鹅35羽,隔离饲养至21日龄;取制备的GoCV病毒样品100ul,采用点眼、滴鼻和口服(分别为1滴、2滴、2滴)的方式试验性感染了30只阴性鹅,另5只单独隔离饲养不攻毒,作为阴性对照。试验鹅每周进行临床观察、称重并采集血清;攻毒组分别于攻毒后1、2、3、4、5、7周扑杀5只鹅,阴性对照组分别于对应于攻毒后的4周和5周各扑杀3只和2只鹅,进行病理解剖,观察各脏器的大体病理学变化;称量脾脏和法氏囊,计算脾体和囊体指数;并取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏与十二指肠、法氏囊、胸腺、脑、空肠、回肠、盲肠扁桃体和骨髓共14种组织进行固定、切片,进行组织病理学观察。临床观察发现:攻毒组从攻毒后第2周到第4周多数个体出现明显的拉稀症状,致使鹅羽毛脏乱,从第3周起见一些个体体质虚弱,肉眼即能分辩出个体差异加大,一些个体体质虚弱,其中1只鹅还出现烂羽现象,体重数据显示攻毒组鹅生长均匀度明显不如对照组。对攻毒组鹅进行解剖观察到以下病理变化:心外膜出血(40%)、心肌乳头索状出血(88.3%);肝脏表面有出血斑(76.7%)、部分位置呈土黄色(23.3%);脾脏表面呈花斑状(13.3%);肺脏有出血(26.7%)和气肿现象(30%);肾脏表面有出血点(13.3%);胰脏有出血现象(30%);法氏囊有出血现象(13.3%);胸腺出血(36.7%);鹅脑膜充血(16.7%);空肠、回肠病变不明显。对阴性组鹅解剖发现:有3只肝脏表面有轻微出血斑;3只心肌乳头轻微索状出血;1只肺脏有出血,其他器官表观正常。组织病理学观察显示:攻毒组鹅肝脏空泡变性,中央静脉周围炎性细胞浸润;肺脏有间质性肺炎,出血;肾小管上皮颗粒变性,间质充血;心肌纤维间出血;胰腺坏死,有炎性灶;法氏囊淋巴细胞减少。对照组鹅组织病理学观察显示各脏器病变不明显。脾体和囊体指数显示:攻毒组鹅和对照组鹅数据差异不显著。本实验室已建立了GoCV检测的ELISA方法,为进一步证明应用羊抗鸡酶标二抗进行鹅血清抗体检测的可靠性,本实验应用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊IgG,比较上述动物IgG (IgY)粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;用直接ELISA方法分析上述不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体检测结果。结果表明:鸡、鸭、鹅IgY具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗检测鹅血清抗体。
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