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目的通过建立肺癌Lewis细胞(Lewis Lung Cancer,LLC)与骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)共培养体系,研究肿瘤微环境下BMSCs的形态、增殖、周期及肿瘤相关成纤维细胞(Tumor-associated Fibroblasts,TAFs)蛋白表达的变化;分析并探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对肺癌微环境中BMSCs增殖规律的影响及保护作用。方法:1.采用CCK-8法于12~96 h分别检测0~200μg/m L APS对BMSCs、LLC细胞体外增殖的影响,筛选APS最佳有效浓度;利用苯酚-硫酸法检测6~72 h内BMSCs、LLC细胞对最佳浓度APS体外代谢的影响,筛选APS最佳药效时间;2.建立LLC细胞和BMSCs的共培养体系,实验分4组:正常BMSCs组、肺癌LLC组、共培养模型组及APS最佳药物浓度干预组,同时分别设立48 h换液、72 h换液及不换液3种不同处理方式;3.通过CCK-8法、流式细胞术分别检测共培养体系中各组细胞的增殖及细胞周期的变化;4.采用Western blot技术检测共培养体系中各组细胞TAFs标记分子α-SMA、FAP蛋白的表达变化。结果:1.与对照组相比,50μg/m L APS作用于BMSCs 24~96 h促增殖作用明显,且可抑制LLC增殖,差异有统计学意义(P<0.01);100μg/m L与200μg/m L APS作用于LLC 24~96h起抑制作用,差异有统计学意义(P<0.01),作用于BMSCs 60~96 h可抑制其增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。2.随着细胞体外培养时间延长,含50μg/m L APS的DMEM/F12完全培养基糖的含量呈递减趋势,差异有统计学意义(P<0.05),36~48 h该含量降至半量。3.倒置相差显微镜下,正常BMSCs组细胞为梭形,形态均一,排列有序;Co-BMSCs组细胞形态不规则,排列紊乱,可见团簇状生长;APS-Co-BMSCs组细胞大部分呈梭形,分布较均匀,偶见细长或团簇状细胞。4.与正常BMSCs组细胞相比,Co-BMSCs组细胞第3~7天生长速度显著加快,差异有统计学意义(P<0.05);与Co-BMSCs组细胞相比,APS-Co-BMSCs组细胞第5~7天生长速度缓慢,差异有统计学意义(P<0.05)。5.细胞周期检测显示,与正常BMSCs组细胞相比,Co-BMSCs组细胞G1期比例降低,S期比例升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Co-BMSCs组细胞相比,APS-Co-BMSCs细胞G1期比例升高,S期比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。6.蛋白印迹结果表明,与正常BMSCs组细胞相比,Co-BMSCs组细胞α-SMA、FAP蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Co-BMSCs组细胞相比,APS-Co-BMSCs组细胞α-SMA、FAP蛋白表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与不换液APS-Co-BMSCs组细胞相比,48 h换液及72 h换液APS-Co-BMSCs组细胞α-SMA、FAP蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),且48 h换液APS-Co-BMSCs组细胞α-SMA、FAP蛋白表达最少。结论:肺癌微环境中BMSCs细胞生物学特性出现遗传稳定性变化,该变化可能与肺癌微环境可促使BMSCs向TAFs分化存在一定相关性;APS可抑制BMSCs在肺癌微环境中的遗传稳定性的变化,且每隔48 h换液,可保持药物浓度进而提高APS的干预效果,其分子机制可能与APS改善肺癌微环境,抑制BMSCs向TAFs分化有关。