恶性黑色素瘤是一种恶性程度高、死亡率高的皮肤肿瘤。由于其恶性程度高、转移早、对放化疗不敏感,每年恶性黑色素瘤在全球能造成超过6万人死亡,且一直呈现增长趋势。早期黑色素瘤患者多采用手术治疗,成功率高、预后较好。但是对于中晚期黑色素瘤患者,治疗手段相对匮乏,疗效欠佳,所以开发新的化疗药物迫在眉睫。目前,中药在临床中的应用越来越广泛,且在许多疾病的治疗中都有良好的效果。此外,据相关报道,一些中药提取物具有抗肿瘤活性。土贝母苷甲是从土贝母块茎中提取的中药单体,能有效抑制许多肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等,其中包括肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌,但其在恶性黑色素瘤中作用机制尚不明确。目的:土贝母苷甲对恶性黑色素瘤细胞自噬和增殖的影响及其机制探索。方法:1.首先,我们选取两种恶性黑色素瘤细胞系MV3和A375作为研究对象,并检测土贝母苷甲在两种细胞系中的IC50。然后,利用MTT实验、Brdu实验、平板克隆实验检测土贝母苷甲对恶性黑色素瘤细胞增殖的影响。2.运用免疫荧光实验检测土贝母苷甲对恶性黑色素瘤细胞自噬的影响,并利用western blot实验检测自噬相关蛋白LC3B、p62在用土贝母苷甲处理之后是否发生相应的改变。除此之外,可利用自噬阻断剂6-氨基-3-甲基嘌呤（3-MA）、氯喹（CQ）来进一步区分阻断性自噬和流通性自噬。3.利用流式细胞技术检测土贝母苷甲以及与CQ联合处理恶性黑色素瘤细胞后对细胞凋亡的影响。同时,检测凋亡相关蛋白的变化情况。4.通过MTT实验、Brdu实验、平板克隆实验以及免疫荧光实验探索土贝母苷甲如何影响恶性黑色素瘤细胞增殖以及自噬（检测对MEK1/2-ERK1/2通路的影响）。另外,在加入土贝母苷甲和MEK抑制剂SL327处理细胞后,通过MTT实验、Brdu实验、平板克隆实验检测细胞增殖能力和自噬水平的变化情况。5.采用小鼠皮下成瘤实验检测土贝母苷甲在体内对恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响。另外,利用HE&IHC实验进一步验证上述实验结果。6.运用ZINC数据库预测土贝母苷甲药物靶点,然后利用ELISA实验、MTT实验、平板克隆实验等来进一步验证该靶点。结果:1.随着药物浓度的增加,土贝母苷甲对恶性黑色素瘤细胞的增殖抑制作用逐渐增强。2.土贝母苷甲可以诱导恶性黑色素瘤细胞发生自噬。另外,联合自噬抑制剂3-MA或CQ后,能明显增强土贝母苷甲对细胞增殖抑制效果,说明了土贝母苷甲诱导的细胞自噬属于保护性自噬。3.土贝母苷甲和自噬抑制剂CQ同时处理细胞后能引起细胞凋亡。4.土贝母苷甲通过激活MEK1/2-ERK1/2通路抑制恶性黑色素瘤细胞增殖,在此基础上加入MEK抑制剂后细胞增殖能力得到恢复。5.土贝母苷甲能有效抑制小鼠体内肿瘤的生长,且与CQ联合后能够加强土贝母苷甲对小鼠体内肿瘤的抑制效果。6.土贝母苷甲通过提高PTP1B酶活性,进而激活下游MEK1/2-ERK1/2通路,发挥抗肿瘤作用。结论:1.土贝母苷甲通过PTP1B激活MEK1/2-ERK1/2通路引起恶性黑色素瘤细胞增殖抑制并诱导了保护性自噬的发生;2.土贝母苷甲与自噬抑制剂CQ联用可以增强对恶性黑色素瘤细胞抑制效果。