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伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的包括肉食动物、反刍动物、啮齿动物等多种动物发病的急性传染病,自2011年以来,由变异伪狂犬毒株导致的伪狂犬病的爆发给我国的生猪养殖业造成了巨大的经济损失。gl/gE基因为伪狂犬病病毒的主要毒力基因,可以通过缺失其功能降低病毒的毒力。调查发现广西部分规模猪场普遍存在伪狂犬病病毒感染,本实验室前期从广西采集的样品中分离得到了国内变异株和疫苗株的重组毒株GXLB-2015和TK缺失毒株GXGG-2016。本实验以伪狂犬病病毒GXLB-2015株和GXGG-2016株为模板分别构建了重组质粒pMD18T-LR,通过限制性内切酶酶切和T4DNA连接酶连接的方法插入了EGFP的表达序列作为荧光标记,构建了和GXLB-2015株和GXGG-2016株相对应的含EGFP表达序列的重组质粒pMD18T-L-EGFP-R;通过同源重组的方法成功构建了能够表达EGFP的GXLB-2015株和GXGG-2016株gI/gE双基因缺失重组毒株r GXLB-2015-Δ gl/gE-EGFP和rGXGG-2016-Δ gI/gE-EGFP。为了解GXLB-2015株和GXGG-2016株gI/gE双基因缺失并表达EGFP的重组毒株在体外的生长特性和gl/gE双基因缺失对GXLB-2015株和GXGG-2016株对小鼠致病性的影响,对GXLB-2015株和GXGG-2016株以及它们gI/gE双基因缺失并表达EGFP的重组毒株进行了空斑试验,测定其多步生长曲线;对小鼠进行了攻毒试验,并测定其脑内和肺脏内病毒含量。结果表明:gI/gE双基因缺失并表达EGFP重组毒株产生的空斑与原毒株产生的空斑稍小;r GXLB-2015-△gI/gE-EGFP 比原毒株GXLB-2015的复制繁殖能力稍低,rGXGG-2016-ΔgI/gE-EGFP则显示出明显更低的生长特性,gI/gE双基因缺失并且表达EGFP后,rGXGG-2016-Δ gI/gE-EGFP 比GXGG-2016更迟才出现滴度的快速增加,而r GXLB-2015-△gI/gE-EGFP则比GXLB-2015更早地快速增加病毒的滴度;rGXGG-2016-Δ gI/gE-EGFP与GXGG-2016 一样对小鼠没有致病性,而r GXLB-2015-Δ gI/gE-EGFP则具有比GXLB-2015更低的半数致死量,但开始发病的时间较长,病症更轻,病程更长。本试验初步了解了gI/gE双基因缺失并表达EGFP对GXLB-2015和GXGG-2016的生长特性的影响,为后期gI/gE双基因缺失毒株的构建提供一定的参考,并为以其为载体表达其他病毒的蛋白打下基础。